胰腺癌是起源胰腺外分泌腺恶性程度很高的肿瘤，发病率在国内外均呈上升趋势。临床资料显示：胰腺癌发病率占消化道恶性肿瘤的8％～10％，占全身各种恶性肿瘤的1％～4％。胰腺癌甲．期症状隐匿，无典型临床症状，当患者出现典型的临床表现时，多已是晚期。现有临床诊断和治疗措施总体效果欠佳，患者五年的临床牛存率为0.18％～23％。近年来，流行病学研究显示：胰腺癌在我国的发病率呈上升趋势，严重威胁国人的健康和生命。所以，对胰腺癌发病机理深入的研究迫在眉睫，同时对胰腺癌发病机制的研究也将为胰腺癌临床诊断和治疗提供帮助和支持。 MicroRNA简称miRNA，是新近发现的一类含有18～25个核苷酸不编码蛋白质的RNA，成熟的miRNA通过特异的识别其相应的靶基因，降解或抑制靶基因的mRNA的表达，调控细胞分化，增殖和调亡等。目前，越来越多的研究证实miRNA在肿瘤的发牛和发展中起着重要作用，而且miRNA表达情况可以预测肿瘤的恶性程度和肿瘤病人的预后。为探索miRNA的在胰腺癌中表达情况及其作用，我们做了以下研究工作。 本课题分为三个部分：1.胰腺癌中miRNA的表达谱；2.胰腺癌中miRNA的Real ime RT-PCR验证；3.胰腺癌中miRNA靶基因的生物信息的研究。 第一部分胰腺癌miRNA表达谱 应用miRNA基因芯片，检测胰腺癌中miRNA表达情况，筛选出在胰腺癌中明显上调或下调的miRNA进行进一步研究。 方法：提取4例胰腺痛组织和对应的胰腺正常组织RNA以及人胰腺癌细胞株和人胰腺正常导管上皮细胞中RNA，利用miRNA基因芯片检测胰腺癌中mciroRNA的表达情况。 结果：1.在组织中表达上调大于两倍的miRNA有：miR-18l、miR-1、miR-325、PREDICTED-MIR-206、miR-101、miR-10b、PREDICTED-MIR-166、miR-100、miR-338。下调大于两倍的miRNA有：miR-542-5p、miR-216、miR-200c、miR-557、miR-503、 miR-217、 miR-31、 miR-572、 miR-660、 miR-200a、 miR-296、PREDICTED-MIR-143、miR-182、miR-373*、 miR-152、 miR-424。PREDICTED-MIR-206、PREDICTED-MIR-166、PREDICTED-MIR-143位计算机预测出来的miRNA。上调表达差异最大的是miR-181，为10.4倍。下调中表达差异最大是miR．542-5p，为6.2倍。在细胞系中上调两倍以上的miRNA：miR-214、miR-125b、miR-184、miR-17.5p、miR-526b、miR-526c、miR-512-5p、miR-3l、miR-130a、miR-222、miR-194、miR-29a。下调大于两倍的miRNA有：let-7i、miR-299.3p、miR-103、miR-453、miR-22、miR-103、miRl07、miR-30d、miR-27a、miR-218。其中上调表达差异最大的是miR-214，上调倍数为11.11，下调表达差异最人为let-7i，下调倍数为89.1下调。 结论：通过miRNA基因芯片筛选miRNA在胰腺痛肿瘤组织和胰腺正常组织以及胰腺癌细胞和胰腺正常细胞表达差异，我们得出miR-181和miR-214可能是胰腺癌中表达较特异的miRNA。 第二部分胰腺癌中miRNA表达的Real-time RT-PCR验证 从上述miRNA基因芯片的结果我们得出miRNA在胰腺癌中的表达谱。结合实验结果和相关文献，我们选择上调差异较明显的miR-214，进一步验证miRNA基因芯片的结果。 方法：提取胰腺癌细胞和胰腺正常导管上皮细胞总RNA，采用探针法应用实时定量逆转录一聚合酶链反应检测miR-214在肿瘤细胞和正常细胞表达差异，以U6作为内参照。进行Real time PCR反应。 结果miR-214在胰腺癌中表达明显上调，证实miR-214在基因芯片中的表达结果真实可靠。 结论：miR-214在胰腺癌中表达上调，可以作为胰腺癌miRNA表达谱中上调特异的基因。 第三部分胰腺癌中miRNA靶基因的生物信息学研究 应用牛物信息学的方法查找miR-214靶基因并对其进行在分析。 方法：利用PicTar、TargetScan、MiRana等算法在网络上中查询与胰腺癌相关的miR-214的靶基因。 结果：查询到miR-214的靶基因约有700个，这些基因与细胞增殖，细胞凋亡，细胞分化，细胞周期，细胞信号转导，细胞迁移等相关。 结论： miR-214可能通过调控细胞的增殖、凋亡、分化，周期，信号转导，迁移相关的基因影响肿瘤的发牛和发展。