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研究目的: 本研究总的目标是研究人脐带间质干细胞(hUC-MSC)对乳腺癌细胞株(MCF-7和MDA-MB231)增殖和迁移的影响及可能的作用机制,为乳腺癌的诊断治疗提供新的治疗策略,为MSCs临床应用的安全性和可行性提供新的基础和理论依据。 具体目标包括: 1.分离培养、鉴定脐带间质干细胞以及收集上清培养基。 2.探讨hUC-MSC在体外对乳腺癌细胞株增殖和迁移的影响。 3.研究hUC-MSC对乳腺癌细胞株增殖和迁移的作用机制。 研究方法: (1)采用脐带组织块贴壁法分离培养脐带间质干细胞并进行鉴定,取第3-5代用于本实验。 (2)脐带间质干细胞上清培养基的收集。 (3)运用MTT法检测脐带间质干细胞上清培养基对MCF-7、MDA-MB231增殖的影响,用平板克隆形成实验来分析MSCs上清培养基对两种细胞株单个细胞增殖的研究。 (4)用划痕、Transwell迁移实验分析MSCs上清培养基对MCF-7、MDA-MB231迁移的作用。 (5) PCR检测E-cadherin和N-cadherin基因的表达,Western-blot检测相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、p-ERK、PCNA、ZEB1盼变化。 (6)应用体外MTT、Transwell实验和Western-blot检测用ERK抑制剂U0126和MSC的上清培养基共同处理MCF-7、MDA-MB231细胞后,其体外增殖、迁移的变化和相关蛋白表达的改变。 研究结果: (1)经过分离培养,细胞的形念为长梭形,呈漩涡样生长,流式细胞表面标记的结果为CD44,CD90,CD29为阳性,CD34,HLA-DR为阴性。成骨染色为阳性结果,成脂诱导后有脂滴出现,经过以上分离鉴定为脐带间质干细胞。 (2)MTT结果分析:脐带间质干细胞上清培养基作用后促进了MCF-7、MDA-MB231细胞的生长。 (3)经过迁移实验分析,MSCs CM对MCF-7和MDA-MB231迁移产生促进作用。 (4) PCR结果:E-cadherin表达下降,Ⅳ-cadherin表达上升,这与Western-blot的检测结果一致。Western-blot还检测了p-ERK,ZEB1,PCNA的表达,发现MSCs上清培养基处理后p-ERK,ZEB1及PCNA都有不同程度的升高。 (5)用U0126处理乳腺癌细胞后发现:其增殖和迁移能力下降,Western-blot的检测结果E-eadherin表达上升,N-cadherin表达下降。而p-ERK,ZEB1及PCNA都有不同程度的表达下降。 结论: (1) hUC-MSCs上清培养基可以促进MCF-7、MDA-MB231的增殖。 (2) hUC-MSCs上清培养基可以提高MCF-7、MDA-MB231的迁移能力。 (3) hUC-MSCs促进乳腺癌细胞的迁移可能是通过EMT的发生发挥作用的。 (4) hUC-MSCs对乳腺癌细胞的增殖和迁移的作用可能是通过ERK通路的激活而发生的。