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本文探讨了流式细胞仪对斜纹夜蛾(Spodoptera Litura)幼虫血细胞分群方法。以斜纹夜蛾幼虫为供试对象,采用浸叶法和注射法筛选了16种杀菌剂,筛选出活性较好的腈菌唑为研究对象,进一步采用流式细胞术研究了腈菌唑对斜纹夜蛾幼虫血细胞膜通透性的影响及腈菌唑的杀虫活性,以期将腈菌唑作为杀虫剂先导化合物。
流式细胞仪检测结果表明,芋头叶喂养的试虫在3龄、4龄和5龄时分别得到3群、4群和4群血细胞;木薯叶喂养的试虫在3龄、4龄和5龄时均得到稳定的3群血细胞。芋头叶喂养的试虫在3龄、4龄和5龄时的体重增长率分别为47.53%、95.12%和57.32%;木薯叶喂养的试虫在3龄、4龄和5龄时的体重增长率分别为44.21%、83.13%和65.30%。
浸叶处理后观察了16种杀菌剂对斜纹夜蛾幼虫体重增长抑制的影响。在500μg/mL的剂量下处理后24h和48h,腈菌唑对斜纹夜蛾幼虫体重增长抑制作用最明显,试虫体重增长抑制率分别为53.59%和68.87%。注射处理研究了16种杀菌剂对斜纹夜蛾幼虫的毒杀活性,其中腈菌唑对斜纹夜蛾幼虫的毒杀活性比较理想,以0.5μg/头注射处理后24h,校正死亡率为46.4%。
流式细胞术研究了腈菌唑对斜纹夜蛾血细胞膜通透性的影响。结果表明,以0.5μg/头、1.0μg/头和2.0μg/头剂量的腈菌唑注射处理斜纹夜蛾4龄幼虫后24h,试虫血细胞内PI荧光强度增加率分别为34.32%、38.55%和51.45%,FITC荧光强度增加率分别为13.99%、29.81%和47.03%,细胞膜电位(DiBAC<,4>(3))荧光强度增加率分别为47.45%、74.95%和79.92%;处理后48h,PI荧光强度增加率分别为32.88%、36.71%和59.55%,FITC荧光强度增加率分别为13.46%、30.60%和47.19%,DiBAC<,4>(3)荧光强度增加率分别为50.36%、77.70%和94.42%;处理后72h,PI荧光强度增加率分别为59.50%、80.46%和84.04%,FITC荧光强度增加率分别为18.23%、31.72%和53.53%,DiBAC<,4>(3)荧光强度增加率分别为77.39%、92.48%和156.60%。腈菌唑注射处理可使试虫血细胞体积减小。以上结果表明,腈菌唑可使大分子荧光物质PI和FITC透过斜纹夜蛾幼虫血细胞膜;处理后血细胞膜电位升高,血细胞体积明显变小。可见,腈菌唑对斜纹夜蛾幼虫血细胞膜通透性有影响。
注射处理后,腈菌唑对斜纹夜蛾4龄幼虫具有较好的毒杀活性,处理后24h、48h和72h,LD<,50>值分别为1.39μg/头、1.03μg/头和0.97μg/头;鱼藤酮在处理后24h、48h和72h,LD<,50>值分别为1.88μg/头、1.59μg/头和1.53μg/头,毒杀活性明显低于腈菌唑。腈菌唑注射处理后能降低试虫的取食率、体重增长率、化蛹率和羽化率。
以0.5μg/头、1.0μg/头和2.0μg/头剂量的腈菌唑注射处理斜纹夜蛾4龄幼虫后24h,试虫血液中血细胞数分别下降了7.88%、23.09%和24.02%,血淋巴含量分别降低了21.38%、28.50%和38.41%,血淋巴总糖量分别下降了4.33%、25.38%和37.76%,幼虫总糖量分别降低了18.12%、41.95%和51.44%,血细胞蛋白质含量分别降低了18.19%、24.89%和32.47%;处理后48h,血细胞降低率分别为23.84%、35.92%和48.73%,血淋巴含量分别降低了12.11%、19.92%和34.08%,血淋巴总糖量分别降低了22.96%、50.86%和80.46%,幼虫总糖量降低率分别为37.15%、44.96%和58.70%,血细胞蛋白质含量降低率分别为20.16%、25.33%和32.33%。以0.5μg/头、1.0μg/头和2.0μg/头剂量的腈菌唑注射处理斜纹夜蛾4龄幼虫后6h,G<,2>/M期血细胞含量分别为13.40%、7.40%和5.41%,低于CK的42.52%;处理后12h,G<,2>/M期血细胞含量分别为12.01%、6.78%和4.35%,低于CK的40.36%;处理后24h,G<,2>/M期血细胞含量分别为9.48%、7.59%和4。89%,低于CK的40.13%。可见,腈菌唑能影响试虫血细胞、血淋巴含量、血淋巴总糖量、幼虫总糖量、血细胞蛋白质含量和血细胞周期等重要生理指标。
腈菌唑对斜纹夜蛾幼虫血细胞膜通透性有明显影响,对试虫有较好的注射活性,这表明以腈菌唑为先导化合物,经过结构改造合成一系列衍生物,开发新型的杀虫剂具有良好的研究潜力。