【摘 要】
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根据内共生学说,线粒体的前体细菌被原始真核生物吞噬之后,大部分的细菌基因转移到细胞核。为了维持线粒体正常的生理活性和功能,细胞核和线粒体基因组就需要受到调控以确保
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根据内共生学说,线粒体的前体细菌被原始真核生物吞噬之后,大部分的细菌基因转移到细胞核。为了维持线粒体正常的生理活性和功能,细胞核和线粒体基因组就需要受到调控以确保相互协调的表达。在植物细胞中,核基因编码并且特异定位到细胞器的蛋白控制转录后和翻译后机制。拟南芥AtERGm正是由核基因编码并特异定位到线粒体,含有可结合:RNA的KH结构域的一种小分子G蛋白。 首先通过将人ERAL1蛋白序列在NCBI Blast的方法,确定了拟南芥中Era类似蛋白,共两个,并分别命名为AtERGm(AtlG30960)和AtERGc(At5G66470)。进一步的蛋白结构分析,AtERGm、AtERGo和人ERAL1结构组成相似:N端的定位信号区,中间的GTPase结构域和C端的KH结构域。TargetP预测AtERGm特异定位于线粒体,AtERGc特异定位于叶绿体。 为了探究AtERGm在亚细胞水平上的定位,采用了将AtERGm-GFP真核表达载体瞬时转化拟南芥叶片原生质体、稳定转化烟草BY-2悬浮细胞和获得转基因植株的方法,对AtERGm的定位有了初步的观察。通过Rear Time PCR和构建PAtERGm::GUS转基因植株的方法,发现了AtERGm在茎尖和花中表达量高,而且在受精之后的花表达量最高。通过对AtERGmT-DNA插入突变体的观察,发现atergm胚胎(atergm/atergm)纯和致死。进一步通过DIC显微技术观察突变体的胚胎,发现部分胚胎早期发育不同程度缓慢并最终停止。 本实验的初步结果预示AtERGm在拟南芥早期胚胎发育中发挥重要的作用。
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