兔视网膜色素上皮细胞的培养与保存

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视网膜色素上皮细胞(RPE细胞)移植,目前被认为是治疗某些视网膜疾病,例如年龄 相关性视网膜黄斑病变(ARMD)的一种有前途的方法,国内外许多学者对此问题进行深入的研究.实现移植的首要问题是RPE细胞的分离,培养与保存,为此,研究人员设计了下面两个 实验:实验一:兔RPE细胞的分离与培养;实验二:兔RPE细胞的冻存与复苏.目的:研究TPE细胞在二步酶消化法分离后的的离体状态下生物学特性及冻存复苏后细胞结构的变化.结 果:采用二步酶消化法获取的原代细胞,呈球形悬浮于培养液中,细胞浆内黑色素颗粒多,反光强.48-72小时后细胞贴壁生长.细胞传5代后H-E染色鉴定,可见了RPE细胞胞浆成粉红色,胞核成蓝色,可见许多双核细胞,免疫组化法染色鉴定,可见细胞着色率100﹪,细胞 浆被染成深浅不同的黄色,以核周围黄色最浓,说明其抗原表达最强.冻存细胞复苏后计算细胞存活率在75-85﹪再传代2次后进行H-E染色与免疫组化染色鉴定,结果同前.电镜下见 细胞内的基底内褶,顶端微绒毛.黑色素颗粒及线粒体等都很完整,相邻细胞间形成了微绒毛与紧密联接.
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