军团菌是一种兼性胞内寄生菌,可引起严重的呼吸道传染病,广泛存在于天然淡水环境和人工水环境中。人体吸入含有军团菌的气溶胶,饮用受军团菌污染的水或创面接触污染水源都可能导致军团菌的感染。随着城镇的现代化程度越来越高,集中空调和供水系统等设施的使用范围不断扩大,由此而带来的军团菌病的潜在危害性也大大增加,尤其是在封闭的公共场所里军团菌病更容易扩散传播。目前已有多种方法应用于军团菌的检测鉴定中,常用的方法包括分离培养法、生化反应、血清分型鉴定、PCR、核酸探针、患者的尿抗原、血清抗体检测。但分离培养法灵敏度低,培养时间长;生化反应分辨率低,稳定性和重复性差;血清分型只能检测已知菌种,且不同血清型之间存在一定程度的交叉反应;常规的分子生物学方法(如PCR)需要昂贵的仪器设备,容易产生交叉污染,对操作人员的技术要求较高。环介导等温扩增技术(LAMP)是近几年开发的一种新颖的恒温核酸扩增技术,在等温条件(63℃左右)反应30~60分钟即完成检测。与常规PCR相比,LAMP不需要热循环、电泳及紫外观察。广州迪澳生物科技有限公司基于LAMP的原理开发了一种新颖的嗜肺军团菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)。该试剂盒可直接对水样进行高通量快速检测,操作简便、灵敏度高、特异性强,特别适用于简易的基层实验室和现场高通量快速检测。本论文分别应用分离培养法、嗜肺军团菌核酸检测试剂盒(恒温荧光法)和PCR法对酒店、地铁、商场、写字楼和工厂等公共场所的环境水样共798份进行军团菌检测。结果显示,分离培养法共检出军团菌阳性水样33份,其中30份为嗜肺军团菌,嗜肺军团菌阳性率为3.8%(30/798);PCR法共检出军团菌阳性水样93份,其中62份为嗜肺军团菌,嗜肺军团菌阳性率为7.8%(62/798);试剂盒共检出嗜肺军团菌阳性水样115份,嗜肺军团菌阳性率为14.4%(115/798)。可见试剂盒检测嗜肺军团菌的阳性率高于PCR法和分离培养法。此外对三种方法的检测灵敏度进行模拟水样试验,结果显示,试剂盒的灵敏度为21 CFU/m L,高于PCR法和分离培养法。