HRPGC/MS系统检测农产品中单增李斯特菌特征信息的研究

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:weishenmeme11
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
食品中的致病菌是引起食物中毒的主要原因之一,其中单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是近年来新增的最重要的食源性病原体之一。该菌广泛存在于自然界,不仅导致人类多种疾病的发生,死亡率高达30%-40%,而且能够感染动物,严重威胁着人们的健康并造成经济损失。近二十年来,世界各地的食源性李斯特菌病不断增多,流行病学的调查结果表明,该病主要是由于人食用了污染单增李斯特菌的食品而引起。因此,亟需建立一种快速、准确的检测和鉴定食品中单增李斯特菌的检验方法。裂解技术起源于上世纪50年代,其中高分辨率热裂解气相色谱质谱技术(HPRGC/MS)是借助高温环境将样品裂解为小分子碎片和特征性的裂解产物,通过高分辨率的毛细管柱对复杂的裂解组分进行分离,结合质谱检测器对裂解组分进行结构确证的一种方法。本论文旨在利用HRPGC/MS技术结合化学计量学软件,建立农产品中单增李斯特菌HRPGC/MS指纹图谱和特征信息,在全细胞水平上对单增李斯特菌进行同源性分析、鉴定,并建立快速检测农产品中单增李斯特菌的方法。(1)以单增李斯特菌标准株CMCC54004为试验菌株,对影响HRPGC/MS系统的诸多因素进行考察,如:色谱柱、裂解温度、裂解时间、GC升温程序等参数进行研究优化,在单因素条件基础上确立HRPGC/MS系统最佳实验操作条件:采用的气相色谱柱为DB-WAXTER毛细管色谱柱;最佳的裂解温度为650℃;最佳裂解时间为5 s;采用的三段式程序升温方式。裂解炉类型为CDS5000脉冲式裂解仪。通过对该方法的连续测定的精密度和重复性精密度的研究,其结果表明HRPGC/MS系统检测单增李斯特菌的方法具有较好的精密度和稳定性。由此建立了HRPGC/MS技术分析和鉴定的微生物规范性的方法。(2)采用此方法对李斯特菌属6个种的标准菌株,20株单增李斯特菌分离株,以及大肠杆菌、沙门氏菌、志贺氏菌、产气肠杆菌、奇异变形杆菌、副溶血弧菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌,枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌等10种属外细菌进行检测,通过对裂解图谱的比对分析,初步建立了不同属种微生物的裂解指纹图谱库;结合聚类分析软件,得到的聚类分析结果显示HRPGC/MS技术可实现在细菌属、种水平快速、准确地区分和鉴定;对未经单增李斯特菌污染的空白农产品进行研究,通过对裂解产物的比较,得到单增李斯特菌HRPGC/MS的特征色谱峰为保留时间19.056 min的裂解峰,对应的质谱图主要离子m/z为54,98,与质谱库中5-甲基-2(5H)-呋喃酮相似度较高。该特征信息被用于农产品中单增李斯特菌的检测应用。(3)根据单增李斯特菌HRPGC/MS的特征色谱峰,采用选择离子监测(19.056 min处m/z 54,98)的质谱检测模式,对人工污染单增李斯特菌的牛肉、牛奶和黄瓜等样品进行检测,并且以不同浓度人工污染单增李斯特菌黄瓜样品为研究对象,制作标准曲线,结果显示在污染单增李斯特菌浓度6.50×109-1.04x1011cfu/g范围内呈良好的线性相关,相关系数为0.996。因此,从理论上证实该方法对农产品中单增李斯特菌的快速检测是切实可行的。
其他文献
目前 ,IT企业员工外部流动率加剧 ,要想有效地保留优秀员工 ,应该从员工进入的最早阶段———招聘开始 ,而要想做好招聘工作 ,必须作好两项关键性工作———职务分析和胜任力
丽水市药用蕨类植物资源十分丰富 ,就其区域分布 ,药用性能进行介绍
针对中国畜牧业,特别是养兔业发展面临常规饲料资源严重不足的问题,提出非常规饲料资源开发的必要性和紧迫性。阐述了非常规饲料的定义、特点、种类及合理利用应该注意的问题
利用钻土法及根系扫描分析系统研究不同产量类型大豆R5期根系在植株周围、株间及垄间土壤中的空间分布特征。结果表明:高产类型大豆根冠比较高,而且单位根长、根表面积的地上
<正>在历史的长河中,有一位至今熠熠生辉的人物形象,他便是战国末年的弱国臣子唐雎,他的凛然正气千百年来仍然令人震撼。不久前,我带领学生学习《唐雎不辱使命》一文,重温那
目的:了解新疆油田作业工人职业紧张、睡眠障碍及心理障碍的状况,探求职业紧张、睡眠障碍与心理障碍的关联,探讨生物钟基因基因多态性在职业紧张导致心理障碍中的作用。方法:
真菌病又称霉菌病,可原发于真菌感染,亦可继发于病毒或细菌感染.真菌对人体的致病力呈条件性、机会性损害,机体在健康状态下对真菌有较强的抵抗力,不易得病,真菌病发生和发展
立人先立心,育人先育德,对于人才全方面的培养,首先要从其德行的培养方面入手,德行是做人的根本,尤其作为培养下一代的重要阵地,如何更好的在学校中开着德育教育工作一直是我
文中应用有限元方法对云南阿海水电站水轮发电机定子机座和上机架结构的刚、强度进行了联合计算分析,指出了在各种运行工况运行时发电机定子机座和上机架的受力情况,为工程及设
针对多齿铣削过程中振动信号的特点,提出了一种基于经验模态分解(EMD)和独立分量分析(ICA)相结合的方法,对混叠在振动信号中的铣刀破损信号进行分离。对振动信号进行经验模态分解提