氰戊菊脂致睾丸间质细胞睾酮合成和相关基因表达节律的改变

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目的:观察氰戊菊酯对睾丸间质细胞睾酮合成和相关基因表达节律的改变,为探讨氰戊菊酯对生殖功能损害的机制提供基础资料。方法:(1)采用体外培养的小鼠睾丸间质细胞株(TM3),用ELISA法测定睾酮浓度,CCK8法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期的变化。(2)采用荧光定量PCR法检测钟基因与睾酮合成相关基因的表达。(3)氰戊菊酯作用24h后,不同时间点(0:00、4:00、8:00、12:00、16:00、20:00、24:00)收集细胞,荧光定量PCR法检测钟基因与睾酮合成相关基因Bmal1、RORa、REV-erbα、StAR的节律性表达。(4)流式细胞仪检测细胞内[Ca2+]i的浓度。结果:(1)小鼠睾丸间质细胞株(TM3)的生长倍增时间为22.53±2.84h。氰戊菊酯可显著抑制睾酮的合成,使睾酮浓度降低了37%。(2)在Leydig细胞中,钟基因Bmal1与睾酮合成相关基因StAR的mRNA表达有昼夜节律性,Bmal1的峰值和谷值分别出现在16:00和4:00,而StAR的峰值和谷值则出现在12:00和4:00。氰戊菊酯处理后,REV-erbα表达水平升高,峰值位相后移,Bmal1,RORa和StAR的表达水平降低,节律均发生改变。(3)氰戊菊酯作用后,细胞内[Ca2+]i增加了9.67%。结论:1.氰戊菊酯染毒可抑制睾酮的分泌,改变钟基因的节律性表达。2.氰戊菊酯对睾酮影响的昼夜时间差异可能与增加细胞内[Ca2+]i离子的浓度有关。
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