微卫星DNA在研究遗传多样性分析、基因组作图、QTL定位、疾病诊断与病理研究、亲缘关系鉴定及个体识别等方面发挥着巨大的作用。梅花鹿是重要的经济动物,也是备受关注的濒危物种。微卫星对于梅花鹿的保护遗传学、QTL定位、种群遗传管理等都非常重要。而目前对梅花鹿的微卫星分离的研究很少。本文以梅花鹿基因组DNA样品为材料,经Mbo Ⅰ酶切并电泳后回收1000bp～400bpDNA片段,一部分回收产物用于构建部分基因组文库,另一部分经过与生物素标记的（CA）₁₅探针杂交,再用磁珠(Dynabeads^? M-280 Streptavidin)富集和PCR扩增后,构建了微卫星富集文库。用（CA）₁₅、（TTC）₁₅等4种探针分别与富集文库和未富集的短片段部分基因组文库进行杂交。并随机挑选58个阳性克隆进行测序。从序列结果中发现,含有微卫星28个,目的克隆比例为43.75%。微卫星种类以与探针（CA）₁₅互补的（CA/GT）_n为主,同时还存在（CT/GA）_n、（ACTGA）_n等为重复单元的微卫星。利用Primer premier5.0和DNAstar软件对19个微卫星位点设计了PCR引物,并建立了PCR体系和程序。10个位点成功扩增,对各个位点等位基因数目、等位基因片段大小范围、等位基因频率分布、观察杂合度等指标的初步评价表明,7个具有良好的多态性。这些微卫星经过系统的遗传特征测试后,可以成为梅花鹿多方面研究的工具。