石榴皮是石榴科植物石榴(Punica granatum L.)的干燥果皮,性温,味酸、涩,归胃、大肠经,具有涩肠止泻,驱虫等功效。常用于久泻久痢,虫积腹痛等。本课题组在前期研究中确定了石榴皮水提物的乙酸酯部位为其抗腹泻的有效部位,并且鉴定出有效成分为安石榴苷、安石榴林及鞣花酸,然而其抗腹泻的机制尚不明确。阐明石榴皮抗腹泻的机制,有助于石榴皮更好的使用,也为进一步提取工艺的研究奠定基础。因此,本研究首先采用RNA-seq转录组学方法在基因水平上探讨安石榴苷、安石榴林及鞣花酸抗腹泻的可能分子机制,进一步采用田口设计对石榴皮中安石榴苷、安石榴林及鞣花酸提取工艺进行优化,并对该提取工艺得到的提取物的将腹泻活性进行测定。将BALB/c小鼠随机分成空白组、蓖麻油组、安石榴苷+蓖麻油组、安石榴林+蓖麻油组、鞣花酸+蓖麻油组等5组,连续灌胃7天,处死后分取空肠,进行转录组学测试,比较各组之间的差异基因,并进行了GO和KEGG分析。结果表明,蓖麻油组与空白组相比较,一共有711个差异表达基因,其中553个基因上调,158个基因下调;安石榴苷+蓖麻油组与蓖麻油组比较,一共有214个差异表达基因,其中104个基因上调,110个基因下调;安石榴林+蓖麻油组与蓖麻油组比较,一共有259个差异表达基因,其中130个基因上调,129个基因下调;鞣花酸+蓖麻油组与蓖麻油组比较,一共有273个差异表达基因,其中160个基因上调,113个基因下调。对这些差异基因进行KEGG分析,富集的通路主要有:PPAR信号通路,维生素的消化吸收和视黄醇代谢信号通路等。将转录组学结果结合文献分析,推测安石榴苷、安石榴林、鞣花酸可以通过对这些基因的有效干预,缓解蓖麻油对维生素的消化吸收通路和视黄醇代谢通路的影响,发挥抗腹泻作用。在单因素试验的基础上,采用田口设计对石榴皮中安石榴苷、安石榴林和鞣花酸的提取工艺进行了优化。确定最佳工艺为乙醇浓度20%,提取温度70℃,提取时间2 h,液料比为50 m L/g,粒径大小0.125 mm,提取次数2次。在最佳条件下对石榴皮进行3次提取平行试验,安石榴苷的提取率为(498.66±2.13 mg/g),安石榴林的提取率为(17.89±0.27 mg/g),鞣花酸的提取率为(7.30±0.05 mg/g),实际值与预测值接近。利用蓖麻油诱导的小鼠腹泻模型,对优化提取工艺获得的石榴皮提取物的抗腹泻活性进行测定,并与石榴皮水提物及乙酸乙酯部位进行了对比。结果表明,给予200 mg/kg的三种提取物,都可以延长小鼠的初次腹泻时间,减少稀便数,降低碳末推进率,减少小肠积液,优化后获得的石榴皮醇提物的抗腹泻活性虽弱于乙酸乙酯萃取部位,但明显强于石榴皮水提物,说明优化工艺具有重要的应用价值,能有效提高石榴皮提取物在抗腹泻方面的疗效。本研究首次利用转录组学对石榴皮中活性成分安石榴苷、安石榴林及鞣花酸的抗腹泻机制进行探讨,并采用田口设计对石榴皮中这三个活性成分的提取工艺进行了优化,并采用小鼠腹泻模型证实优化的提取工艺可获得更好的抗腹泻活性提取物,为石榴皮资源在抗腹泻研究方面的进一步开发提供一定的科学依据,为石榴皮在药物提取的工业化生产方面奠定基础。