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妊娠滋养细胞疾病(gestational trophoblastic disease，GTD)是一组来源于胎盘绒毛滋养细胞的疾病，包括葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌和胎盘部位滋养细胞肿瘤。尽管滋养层细胞有类似癌瘤细胞的形态与浸润的生物学特征，但是它所导致的各种疾病的性质及生物学行为不尽相同。目前还未发现有一种确切的基因标记物预测其恶变，也没有可靠的分子学诊断方法替代传统的组织病理学诊断。近年来，研究者们通过原位杂交、免疫组化、PCR等方法检测多种调控基因在正常妊娠与葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌之间的差异及生物学意义，认为原癌基因的激活、抑癌基因的失活、细胞周期调控异常、生长因子异常等与妊娠滋养细胞肿瘤(侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌)发病有密切关系。 细胞周期素D1(CyclinD1)是G1期细胞周期蛋白，p16基因编码的p16蛋白是一种重要的肿瘤抑制蛋白，两者通过竞争性与周期素依赖激酶CDK4结合而发挥作用。CyclinD1、p16表达异常可导致细胞周期G1／S检测点异常，使细胞恶性增生。近年来研究发现，血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)参与正常妊娠、胎盘血管形成的调节和滋养细胞生理性的侵入，其升高和 郑州大学2002硕士学位论文CyCllchl、pl6、VEGF在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及意义降低可导致某些病理性妊娠，且与肿瘤的侵袭性生长有关。VEGF在妊娠滋养细胞疾病中的表达及其与细胞周期调控蛋白 CyClinD 1．p16的关系国内尚未见报道。本课题采用免疫组化SP法检测CyclinD 1． PI6、VEGF在正常绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒毛膜癌中的表达，分析正常绒毛、葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒毛膜癌组织中CyClinDI、P16、VEGF表达的差异及VEGF与血管生成的关系，探讨CyClinDI、P16、VEGF在妊娠滋养细胞肿瘤（侵蚀性葡萄胎及绒毛膜癌）发生、发展及判断预后中的作用，并为妊娠滋养细胞肿瘤的基因治疗和从分子水平抗肿瘤血管生成提供理论依据。 方法：收集郑州大学第一、二附属医院住院的葡萄胎患者首次清宫标本 31例，因侵蚀性葡萄胎切除的子宫组织标本 35例（I期 9例，JI期 10例、Ill期 16例），因绒毛膜癌切除的子宫组织标本 12例（I期 5例，11期 2例、Ill期 4例、IV期 1例）。15例妊娠 6～8周人流术后绒毛组织标本作为正常对照。所有标本均经川％中性福尔马林固定、常规石蜡包埋连续切片。4～SPm厚连续切片3张，2张用于兔疫组化，l张行HE染色。全部标本均经组织病理学确诊。采用兔疫组化SP法，检测CyClinDI、pl6、VEGF在正常早孕绒毛。葡萄胎、侵蚀性葡萄胎及绒毛膜癌中的表达。所有数据均以SPSS10．0统计软件包进行统计学处理，采用／检验及计数资料的相关分析，显著性水准a＝0．05。 结果： 1．CyclinDI在妊娠滋养细胞疾病的表达 CyClinD蛋白阳性细胞为棕黄色颗粒，主要是位于细胞核，部分病例胞浆同时表达。从正常绒毛一葡萄胎一侵蚀性葡萄胎一绒毛膜癌，CyClinDI表达率逐渐升高，正常绒毛组为 6．67％门／15人 葡萄胎组为19．35％（6／31），侵蚀性葡萄胎组为71．43％（25／35），绒毛膜癌组为 83．33％门 人妊娠滋养细胞肿瘤组与正常绒毛、葡 2 郑州大学2002硕士学位论文 Qnlll口1、山6、VEG F在妊娠滋养细胞疾病组织中的表达及意义 萄胎组比较 CyclinD 的表达率明显增高，差异有高度显著性叩 t 0二 001）。 2．P16在妊娠滋养细胞疾病的表达 p16蛋白阳性产物主要分布在胞浆或胞膜，部分病例胞核同时表 达，从正常绒毛一葡萄胎一侵蚀性葡萄胎一绒毛膜癌，P16的表达逐 渐减弱。正常绒毛组P16阳性率为86．670（13／15），葡萄胎组为67．74％ （21／31），侵蚀性葡萄胎组为51．43％。： 18／35），绒毛膜癌组为25．00％ u／12人p16蛋白阳性产物在妊娠滋养细胞肿瘤中表达较弱，染色 强度降低。妊娠滋养细胞肿瘤组与正常绒毛、葡萄胎组比较P16的 表达明显降低，有显著性差异叩＜0．005、P＜0．01人 3．VEGF在妊娠滋养细胞疾病的表达 VEGF的阳性产物主要定位于滋养细胞及肿瘤细胞的胞浆内，部 分病例细胞膜同时表达。从正常绒毛一葡萄胎一侵蚀性葡萄胎一绒 毛膜癌，VEGF表达率逐渐升高，正常绒毛组为 20．00％（3／1），葡 萄胎组为29．03％（9／22），侵蚀性葡萄胎组为57．14％（20／35），绒 毛膜癌组为58．33％（7／12）。妊娠滋养细胞肿瘤组与正常绒毛、葡萄 胎组比较VEGF的表达率明显增高，且有显著性差异（Prto．05）。 4．CyclinDI． P16、VEGF表达的相关性 妊娠滋养细胞肿瘤组织中，CyClinDI与VEGF的表达呈正相关 （r＝0．483，P?