本研究通过MTT法和荧光定量的方式测定了去乙酰化酶抑制剂VPA对细胞的毒性和组蛋白乙酰化的影响，并探讨了VPA处理的体细胞对克隆胚胎发育的影响。MTT法测定表明，对细胞处理24h和48h后，其VPA的IC50值(药物半量抑制率)分别为4.25mM和1.9mM；经过4mM的VPA处理24h后，组蛋白H3K9和H4K5乙酰化发生显著变化；经2mM和4mM的VPA处理后，也引起上述两个甲基化位点的显著变化。分别采用0.25、0.5、1.0和4mM的VPA对供体细胞处理24h，然后用处理的细胞进行体细胞克隆。结果表明，经4mM的VPA处理24h的细胞的囊胚率为(15.5％)，显著低于对照组(30.5％)。通过分析发现，VPA可以导致细胞周期阻滞并造成细胞早期凋亡率的增加，而且随着VPA处理浓度的增加也导致了染色体非整倍体率上升。　　 主要研究结果如下：　　 1.VPA对牛胎儿成纤维细胞抑制情况的测定　　 通过MTT法测定不同浓度(0、0.25、0.5、1、2和4mM)VPA对牛胎儿成纤维细胞分别培养24h和48h生长的抑制情况。结果发现，在24h实验组中，VPA处理浓度达到2mM和4mM后，与对照组相比显著抑制细胞的生长。其他处理组与对照之间差异不显著，且半量抑制率IC50为4.25mM。在48h组，随着VPA处理浓度的升高，细胞生长被抑制的情况也越明显。与对照组相比，每一个处理组的抑制情况都具有显著差异，其半量抑制率IC50为1.9mM。　　 2.不同浓度VPA对牛胎儿成纤维细胞组蛋白乙酰化和甲基化的影响　　 1)对组蛋白H3K9和H4K5的乙酰化影响　　 由细胞免疫组化和imagej分析细胞荧光量，并通过SPASS16.0进行统计学分析发现，经4mM的VPA处理24h和48h后，H3K9的乙酰化水平显著增加。经4mM的VPA处理24h，2mM和4mM的VPA处理48h后，H4K5的乙酰化程度显著增加。　　 2)对组蛋白H3K9和H3K4的甲基化影响　　 不同浓度的VPA处理细胞24h后，H3K9的甲基化均呈降低的趋势，而H3K4的甲基化状态并无显著性变化。经VPA处理48h后，H3K9和H3K4的甲基化状态也无显著性变化。　　 3.VPA处理对体细胞染色体倍性的影响　　 随着VPA处理浓度的增加，细胞的染色体倍性的发生了变化。对照组的整倍体率为88％，1mM处理组的整倍体率为76％，4mM处理组的整倍体率为72％。　　 4.VPA对细胞周期的影响　　 经过0.25、0.5、1.0、2.0和4mMVPA处理24h后，随着处理浓度的升高G0/G1期和G2/M期细胞增多，S期细胞减少。在48h处理组中，这种趋势更加明显，所有处理组与对照组之间的差异呈极显著。这说明VPA具有将细胞阻滞在G0/G1期的作用，且随着VPA浓度和时间的增加，VPA的周期阻滞作用愈加明显。经2mM和4mM的VPA处理24h后，出现了一定比例的非整倍体细胞。这说明高浓度的VPA可能导致非整倍体细胞的出现，这与核型分析结果相一致。　　 5.VPA对细胞凋亡的影响　　 经过0.25、0.5、1.0、2.0和4mM的VPA处理24h后，随着浓度的增加，细胞的早期凋亡明显增加，活细胞的比例随之下降。当浓度达到4mM时，这种趋势最为明显。经过不同浓度VPA处理48h后，细胞的早期凋亡更为显著，且随着VPA处理浓度的升高这种早期凋亡诱导趋势更加明显，但VPA处理对晚期凋亡的影响却并不明显。　　 6.VPA处理的体细胞对克隆胚胎发育的影响　　 利用0、0.25、0.5、1和4mM浓度的VPA对体细胞处理24h，克隆胚的卵裂率和囊胚率与对照组相比，没有统计学上的差异。当VPA的浓度达到4mM时，克隆胚的卵裂率和囊胚率的显著下降，分别为65.5％和15.5％。对克隆囊胚的细胞数进行分析表明，随着VPA处理浓度的升高，克隆囊胚的细胞数有下降的趋势，但并没有显著差异。