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目的:探究非甲基化CpG寡聚脱氧核苷酸(ODN)对人膀胱癌的抗肿瘤作用,以及探究表柔比星与卡介苗对人膀胱癌细胞的联合作用。方法:对于探究CpG ODN对人膀胱癌的抗肿瘤作用,我们常规培养人膀胱癌细胞,采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)方法检测CpG ODN处理后的膀胱癌细胞的体外增殖情况,探究膀胱癌细胞对CpG ODN的剂量-时间-效应关系,选取合适的细胞株进行后续试验。以卡介苗作阳性对照,比较CpG ODN的对膀胱癌细胞的体外增值情况。采用流式细胞术检测CpG ODN作用膀胱癌细胞后的细胞凋亡情况和细胞周期分布。蛋白印迹实验(Western Blot)检测药物处理后的膀胱癌细胞中促凋亡因子caspse-3、p53和B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)的表达水平,以及抗凋亡因子B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)的表达水平。对于表柔比星联合卡介苗对膀胱癌细胞作用的探究,同样常规培养人膀胱癌细胞,表柔比星、卡介苗单独作用以及两者联合作用于膀胱癌细胞,采用CCK-8方法检测药物处理作用后的细胞的细胞活性,选取合适的细胞株及浓度进行后续机制实验。采用流式细胞术检测表柔比星、卡介苗单独或联合作用的细胞凋亡情况和细胞周期。Western Blot检测表柔比星、卡介苗单独或联合处理后的膀胱癌细胞中促凋亡因子caspse-3、p53和Bax的表达水平,以及抗凋亡因子Bcl-2的表达水平。结果:CpG ODN和卡介苗均对人膀胱癌细胞起抑制体外增殖作用。CpG ODN对人膀胱癌细胞的抑制体外增殖作用较卡介苗弱。CpG ODN对人膀胱癌细胞呈现时间依赖性和浓度依赖性,其中时间依赖性占主要部分。CpG ODN可以促进人膀胱癌细胞凋亡,而且使细胞在G0G1期发生阻滞从而抑制细胞增殖。CpG ODN可通过上调促凋亡因子的表达、下调抗凋亡因子的表达来实现其对膀胱癌细胞的促凋亡作用,而且凋亡的分子信号转导过程是一个从细胞质到细胞核的级联的信号转导过程。表柔比星与卡介苗均可分别抑制人膀胱癌细胞的体外增殖,当两者联合使用时,膀胱癌细胞在体外的增殖抑制作用最为明显。表柔比星与卡介苗均能促进人膀胱癌细胞的凋亡,也可使细胞停滞于G0G1期,使细胞周期发生改变,当两种药联合作用于膀胱癌细胞时,卡介苗占主导作用。表柔比星通过上调促凋亡因子的表达、下调抗凋亡因子的表达从而达到促膀胱癌细胞凋亡的作用。卡介苗通过上调促凋亡因子表达使膀胱癌细胞发生凋亡。表柔比星和卡介苗的凋亡通路不相同且互相影响,当两种药物联用时,凋亡相关通路以卡介苗所作用的通路为主。结论:CpG ODN通过增强caspase-3、p53和Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,诱导人膀胱癌细胞凋亡,此凋亡过程是一个级联过程,并且具有显著的时间依赖性。CpG ODN改变细胞周期,通过在细胞G0G1期发生阻滞,抑制了人膀胱癌细胞的周期分布。本研究表明,CpG ODN可作为膀胱癌治疗的潜在候选药物。表柔比星通过增强caspase-3、p53和Bax的表达,抑制Bcl-2的表达,引起人膀胱癌细胞凋亡。卡介苗通过增强caspase-3和p53的表达,对人膀胱癌细胞起促凋亡作用。表柔比星联合卡介苗作用于膀胱癌细胞时,早期以卡介苗的作用占主导。表柔比星及卡介苗均可使膀胱癌细胞在G0G1期发生阻滞,从而影响细胞周期分布,最终影响膀胱癌体外增殖,发挥促凋亡作用。