目的：Defensins是近年来发现的广泛存在于动物和植物体内的一类阳离子多肽，它具有广谱、高效杀菌活性，因其独特的抗菌机理，病原微生物不易对其产生耐药性。因此，开展对防御素的研究开发，具有巨大的经济效益和社会效益。 本研究拟根据已报道的猪防御素β-defensin-1基因的cDNA序列，设计二对带双酶切位点的引物（引物Ⅰ扩增的基因PBD-Ⅰ仅编码猪抗菌肽成熟肽，引物Ⅱ扩增的基因PBD-Ⅱ除编码成熟肽外，还编码6个碱基的信号肽），从猪血白细胞中提取RNA，通过RT-PCR方法扩增猪β-defensin-1基因，将该基因重组于原核表达载体PinPointTMXa-3，使其在大肠杆菌JM109中以融合蛋白形式表达，以期得到目的抗菌短肽，并检验信号肽序列对抗菌肽基因表达水平的影响。 方法：根据已报道的猪防御素β-defensin-1基因的cDNA序列，设计二对带双酶切位点的引物，用RNA提取试剂Tripure从猪血白细胞中抽提RNA，通过RT-PCR方法扩增β-defensin-1基因，基因与载体PinPointTMXa-3经酶切，连结，构建成重组质粒ppd-1、ppd-2，转化于大肠杆菌JM109中，经抽提质粒，酶切初步鉴定后，挑取阳性克隆，完成序列分析。阳性克隆经IPTG诱导培养后，进行SDS-PAGE电泳，观察融合蛋白表达。 结果：二对引物经RT-PCR扩增，产物于1.5％琼脂糖凝胶上电泳，扩增片断PBD-Ⅰ、PBD-Ⅱ均约130bp，与预期值相符。将PBD-Ⅰ、PBD-Ⅱ基因与表达载体PinPoint TMXa-3连结后获得的重组质粒ppd-1、ppd-2转化于大肠杆菌JM109中。经抽提质粒、酶切分析及PCR扩增，分别筛选到4个阳性克隆，将其中二个阳性克隆由测序分析，证实1个含PBD－I基因片断，1个含PBD－11基因片断，且阅读框正确，可用于融合蛋白表达。阳性克隆经 IPTG诱导后，进行 SDS－PAGE电泳，观察含 PBD－I阳性重组子在目标位置约 17kDa处有一蛋白带，大小与理论值相符，延长诱导表达时间并不能明显增加表达量，而含PBDJ基因的阳性重组于却末见表达的目的蛋白带。 结论：经过酶切、连结，构建成重组质粒ppd上、ppd上，再经转化、抽提质粒及酶切分析，最后经DNA测序证实，RTICR扩增的PBD－I、PBD－11基因与 piflpd T”XSI表达载体构建成功。含 pBD刁基因阳性菌株经IPTG诱导后，表达一条与理论值相符的蛋白带，表明PBD－I基因在大肠杆菌中成功表达，而含PBDJ基因的阳性重组子未见表达的目的蛋白带，说明PBDJ基因在大肠杆菌中表达不成功。PBD－I基因的成功表达为进一步研究其抗菌活性、抗菌机理打下基础。