论文部分内容阅读
目的: 研究宫内发育迟缓(Intrauterine growth retardation,IUGR)大鼠胰腺PPARγ蛋白和基因水平的表达、Pten蛋白和基因水平的表达,探索宫内发育迟缓大鼠胰腺胰岛β细胞减少机制。 方法: 选取体重230~280g健康Wistar大鼠,雌性为处女鼠,午夜后雌雄合笼(雌∶雄=1∶4),次日晨8:00做阴道涂片,显微镜下见到精子即确认为已交配,确认已受孕大鼠48只。随机分为两组(实验组和对照组),分别用不同饲料喂养。实验组:孕期全程低蛋白饮食组共24只,喂养至正常分娩,母鼠分娩后正常饲料喂养,每窝子鼠控制在8只,以便能获得充足的乳汁,子鼠由母乳喂养至3周龄后断乳,断乳后子鼠正常饲料喂养。对照组:孕期正常饲料饮食组共24只,喂养至正常分娩,母鼠分娩后正常饲料喂养,每窝子鼠控制在8只,以便能获得充足的乳汁,子鼠由母乳喂养至3周龄后断乳,断乳后子鼠正常饲料喂养。本实验选择研究的时间点分别为生后0周(出生12h内)、3周、8周、12周,为排除雌激素的影响8周、12周时间点大鼠仅用雄性,0周、3周时间点不分雌雄性别,研究对象为大鼠胰腺。采用免疫组化方法检测大鼠胰腺PPARγ蛋白和Pten蛋白表达,采用Real-time PCR方法测PPARγ基因和Pten基因表达。 结果: 1、免疫组化结果测定PPARγ蛋白在大鼠胰腺的表达。各时间点实验组(IUGR组)及对照组(CON组)胰岛内均见有棕黄色表达,棕黄色主要表达在β细胞的细胞浆,其它部位表达较少;0w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值为0.1098±0.0156;3w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值为0.0832±0.0230;8w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值0.0752±0.0192;12w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值为0.0672±0.0144;各时间点对照组棕黄色染色较浅,表达较弱;各时间点IUGR组与相应对照组比较差异均有统计学意义(p<0.05)。 2、免疫组化测定Pten蛋白在大鼠胰腺的表达。各时间点实验组(IUGR组)及对照组(CON组)胰岛内均见有棕黄色表达,棕黄色主要表达在β细胞的细胞浆,其它部位表达较少;0w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值为0.1040±0.0172;3w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值为0.2056±0.0379;8w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值为0.1019±0.0145;12w IUGR组棕黄色染色深,表达较多,光密度值为0.1566±0.0136;各时间点对照组棕黄色染色较浅,表达较弱;各时间点IUGR组与相应对照组比较差异均有统计学意义(p<0.01)。 3、Real-time PCR测定PPARγ mRNA在大鼠胰腺的表达。0周IUGR组大鼠胰腺PPARγmRNA的表达明显高于相应对照组(2.264±0.2535 vs1.0000±0.0000,p<0.01);3周IUGR组大鼠胰腺PPARγmRNA的表达明显高于相应对照组(1.6888±0.2753 vs1.0000±0.0000,p<0.01);8周IUGR组大鼠胰腺PPARγmRNA的表达明显高于相应对照组(1.6306±0.3546 vs1.0000±0.0000,p<0.05);12周IUGR组大鼠胰腺PPARγmRNA的表达明显高于相应对照组(1.6211±0.1382 vs1.0000±0.0000, p<0.05)。 4、Real-time PCR测定Pten mRNA在大鼠胰腺的表达。0周IUGR组大鼠胰腺Pten mRNA的表达明显高于相应对照组(2.4446±0.1808 vs1.0000±0.0000,p<0.05);3周IUGR组大鼠胰腺Pten mRNA的表达明显高于相应对照组(2.3809±0.1165 vs1.0000±0.0000,p<0.05);8周IUGR组大鼠胰腺Pten mRNA的表达明显高于相应对照组(2.2684±0.1206 vs1.0000±0.0000,p<0.01);12周IUGR组大鼠胰腺Pten mRNA的表达明显高于相应对照组(2.2142±0.1595 vs1.0000±0.0000, p<0.05)。 结论: 1、IUGR大鼠PPARγ蛋白和Pten蛋白均比正常对照组PPARγ蛋白和Pten蛋白高表达。 2、IUGR大鼠PPARγmRNA和Pten mRNA均比正常对照组PPARγ mRNA和PtenmRNA高表达。 3、IUGR大鼠胰腺胰岛β细胞减少的原因之一可能是不良的宫内营养环境导致PPARγ高表达进一步调控Pten高表达。