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鹅膏属(Amanita)为蘑菇目(Agaricales)鹅膏科(Amanitaceae)中的一个世界性广布大属,其因含有α-鹅膏毒素等,在开发新特效药,如抗肿瘤、抗菌、抗病毒、镇静和麻醉药方面具有潜在的应用和研究前景,因此鹅膏已成为近年来大型菌物的研究热点。鹅膏属绝大部分为外生菌根菌,与高等植物形成共生关系,至今尚不能进行人工培养。目前鹅膏毒素仍只能从野外采集的鹅膏子实体中提取,在自然条件下鹅膏子实体分布很少,产量很低,毒素含量极微,而菌丝体在纯培养条件下生长极其缓慢,菌丝毒素几乎没有活性,因而毒素价格昂贵,售价在每克10万美元以上,难以满足科研及应用所需。
黄柄鹅膏为鹅膏中的一个广布种,具有代表性,且在云南武定狮子山子实体发生较多。因此本论文以武定狮子山为观测样点,以黄柄鹅膏为研究材料,对其生态环境、菌丝体诱导和鉴定、IPDM培养基优化、与滇青冈无菌苗及盆栽苗的共生关系等方面进行了研究。这为今后鹅膏菌丝的大量培养、人工或半人工驯化栽培等提供了一定的理论依据。
本文主要研究结果如下:
1.对光照、温度、空气湿度、土壤水分等生境因子进行了连续测量,结果表明,黄柄鹅膏生境的平均光照度、温度、空气湿度、土壤湿度分别为660.5Lx,16.5℃,85.8%,55.8%,这可为菌丝体室内培养条件的确定提供一定依据;
2.利用ITS分子标记对已分离的菌丝体与子实体进行了鉴定,结果表明,二者的序列长度约为750bp,且碱基序列相似度达到99.7%,说明诱导菌丝体来源于黄柄鹅膏子实体;
3.从碳源、氮源、碳氮比等方面对培养基进行了优化,结果表明,1%葡萄糖为碳源,0.06% NH4NO3+0.017%蛋白胨为氮源较好,适宜的碳氮比为20∶1,优化培养基中菌丝体的生长情况明显优于IPDM培养基;
4.利用有机溶剂对原生境土进行了初步提取,提取物对菌丝促进作用不明显;将生境土直接加入培养基中,20%生境土+1%葡萄糖+0.9%琼脂的培养效果与IPDM培养基相近,此培养基成本低,容易配制,此类培养基的进一步研究将为今后菌丝体的规模化繁殖等奠定重要基础;
5.对滇青冈无菌苗及盆栽苗的根部进行菌丝体接种,在无菌条件下,接种于无菌苗根部的菌丝体生长速度快于对照组(MS培养基);在盆栽条件下,菌丝体虽生长缓慢,但接种菌丝体的植物苗比未接种的生长更好。这为菌根菌共生关系的研究等提供了新思路。