RNA干扰抑制肺腺癌细胞HMGA1表达对放射敏感性的影响

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目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)抑制高迁移率族蛋白A1(HMGA1)基因表达,观察肺腺癌细胞株SPCA-1对放射敏感性的影响。   方法:将前期制备的HMGA1siRNA慢病毒载体转染至肺腺癌SPCA-1细胞并分为阳性组(含HMGA1siRNA细胞)、阴性组(含阴性siRNA细胞)及空白对照组(未转染细胞)。采用半定量RT-PCR和Western blotting分别检测HMGA1 mRNA及蛋白表达情况。细胞克隆形成实验、多靶单击模型拟合绘制细胞存活曲线观察细胞放射敏感性的变化;流式细胞术检测各组细胞凋亡率。   结果:半定量RT-PCR和Western blotting结果显示,与阴性组及对照组相比,阳性组细胞HMGA1基因表达量明显下调。不同剂量照射后,克隆形成实验显示阳性组克隆形成率明显升高(P<0.05);细胞存活曲线显示阳性组细胞D0、Dq、N及SF2分别为:2.36、3.43、4.25、0.91,高于对照组(2.04、1.53、2.13、0.63)及阴性组细胞(2.09、1.58、2.15、0.64)(P<0.05);流式细胞术检测阳性组细胞凋亡率均低于对照组及阴性组(P<0.05)。   结论:(1)、通过慢病毒介导的RNAi技术可以成功抑制肺腺癌细胞SPCA-1中HMGA1基因的表达。(2)、HMGA1siRNA特异性下调SPCA-1细胞中HMGA1基因表达,抑制细胞凋亡,并降低细胞的放射敏感性,提示HMGA1可能是肿瘤细胞放射敏感性的一个预测因子。
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