论文部分内容阅读
目的：
通过检测杞精明目汤药物血清对体外培养的结膜松弛症球结膜成纤维细胞MMPs和TIMPs的表达；并通过透射电镜观察结膜松弛症球结膜组织的超微结构变化，探讨结膜松弛症发病机制及杞精明目汤对结膜松弛症发生发展的防治作用。
方法：
1.结膜松弛症成纤维细胞的培养：
收集结膜松弛症松弛结膜组织16例、翼状胬肉组织11例和正常球结膜组织5例，观察成纤维细胞的生长状态，筛选最适合结膜松弛症成纤维细胞的生长的培养基。
2.MMPs及TIMPs检测：
体外培养结膜松弛症松弛结膜成纤维细胞，分成对照组、5％药物血清组、10%药物血清组、15%药物血清组、20%药物血清组、EGF8ul/ml西药对照组，应用Elisa法检测MMP1、MMP3、TIMP1和TIMP3表达。
3.结膜松弛症球结膜超微结构观察：
采用透射电镜对比观察结膜松弛症球结膜和正常球结膜的超微结构。
结果：
1.结膜松弛症成纤维细胞培养方法的探索：
采用DMEM/F12培养基可使结膜松弛症成纤维细胞少量从组织块内溢出，但不能传代。采用含10%胎牛血清、1ul/mlFGS的DMEM-H培养基可使结膜松弛症成纤维细胞顺利生长，且能够传代。
2.MMPs及TIMPs检测结果：
对照组中MMP1表达量为16.306+0.099ng/ml较20%药物血清组11.875±0.113表达量高，差异有统计学意义(t=87.394，P=0.000);对照组中MMP3表达量为4.443±0.115ng/ml较20%药物血清组3.498±0.030ng/ml表达量高，差异有统计学意义(t=21.991，P=0.000);对照组中TIMP1表达量为3.200±0.317ng/ml较20%药物血清组2.061±0.054ng/ml表达量高，差异有统计学意义(t=9.565，P=0.000)对照组中TIMP3表达量为1.538±0.050ng/ml较20%药物血清组1.743±0.065ng/ml表达量低，差异有统计学意义(t=5.046，P=0.004)。
3.结膜松弛症球结膜超微结构观察：
结膜松弛症球结膜固有层成纤维细胞数量减少，外形呈长梭形，胞突细长，核-浆比增大；胶原原纤维紊乱，并出现局灶性溶解缺失；正常结膜成纤维细胞呈卵圆形或多角形，胞突短粗长，细胞间质富含胶原原纤维；结膜松弛症筋膜层成纤维细胞呈线形，胶原原纤维严重缺失；正常球结膜的筋膜层成纤维细胞呈梭形，细胞间质内胶原原纤维丰富。
结论：
1.最适宜培养结膜松弛症成纤维细胞的培养基是含10%胎牛血清、1ul/mlFGS、100U/ml青霉素、100ug/ml链霉素的DMEM-H培养基。
2.20%杞精明目汤药物血清可抑制结膜松弛症球结膜成纤维细胞中MMP1、MMP3、TIMP1的高表达，同时提高了TIMP3的表达量。杞精明目汤对结膜松弛症有保护治疗作用。
3.结膜松弛症球结膜固有层及筋膜组织中成纤维细胞变性、胶原原纤维减少。