EZH2参与介导缺氧诱导的TGFBR2表达沉默和前列腺癌进展目的:转化生长因子β(Transforming Growth Factor β,TGF-β)信号通路和缺氧微环境的变化都被证明在包括前列腺癌(prostate cancer,PCa)在内的许多肿瘤的进展中发挥作用。新的证据也表明,TGF-β通路的重要调节蛋白转化生长因子β受体2(transforming growth factor β receptor Ⅱ,TGFBR2)的下调在PCa的发生发展中担当重要角色,但其在PCa中的生物学功能和分子生物学调控机制还有待进一步阐明。本研究中我们旨在阐明缺氧微环境和TGF-β信号通路间的调控网络,更好明确PCa中的分子调控机制。方法:通过在缺氧或正常氧条件下培养前列腺癌细胞系来评价缺氧对TGFBR2表达的影响。利用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation specific polymerase chain reaction,MSP)和去甲基化药物处理,来验证TGFBR2的启动子可发生甲基化沉默。此外通过特异性小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)或小分子抑制剂沉默Zeste增强子同源物 2(Enhancer of zeste homolog 2,EZH2)用于验证 EZH2 对 TGFBR2 的表观遗传学沉默调节。此外我们进行了 PCR、蛋白质印迹和荧光素酶检测,研究miR-93和TGFBR2在PCa细胞系和标本中的关系。我们还检测了缺氧处理对EZH2和miR-93表达的影响,并进一步检测了 miR-93对PCa细胞增殖和上皮间充质转化的影响。结果:缺氧条件下TGFBR2的表达减弱。缺氧可诱导EZH2表达上调,从而促进组蛋白 H3 的第 27 位赖氨酸的三甲基化(Histone H3 Lys27 trimethylation,H3K27me3),其引起TGFBR2启动子高甲基化并造成其在PCa中表观遗传学沉默。此外,miR-93在PCa组织和细胞系中显著上调,且与TGFBR2的表达呈负相关。miR-93的异常过表达促进PCa细胞增殖、迁移和侵袭,且其表达也可以被缺氧处理所诱导。此外,TGFBR2是miR-93的真正靶标,miR-93可通过下调TGFBR2促进PCa的进展。结论:我们的研究结果阐明了 PCa处于缺氧环境时可通过包括EZH2介导的高甲基化和miR-93诱导的转录后机制,减少TGFBR2的表达水平,从而促进PCa的癌症进展。长链非编码RNA TUG1通过EZH2参与的miR-194-5p表观遗传学沉默介导膀胱癌增殖及化疗药物抵抗目的:牛磺酸上调基因1(TUG1)已被证实参与一些人类癌症的肿瘤发生,但其在膀胱癌中的确切生物学作用及机制仍未阐明。方法:通过实时定量PCR测定基因的mRNA表达水平,利用甲基化特异性PCR测定基因启动子的甲基化水平,利用蛋白质印迹实验检测蛋白表达。通过荧光素酶报告基因系统明确miRNA和靶标基因是否结合,通过MTS实验、集落形成试验观察对细胞增殖的影响,利用流式细胞术明确实验处理对细胞凋亡的影响。结果:在本研究中,我们发现TUG1在膀胱癌中上调,TUG1的表达与CCND2和miR-194-5p分别呈正相关和负相关。MiR-194-5p表达在膀胱癌中常通过启动子高甲基化而降低,而经顺铂和去甲基化药物5-Aza-DC处理后其表达上升。此外,敲减TUG1可下调表观遗传调节因子EZH2的表达,减弱miR-194-5p的启动子高甲基化并诱导其表达。miR-194-5p表达增加或TUG1表达降低使膀胱癌细胞对顺铂敏感,抑制增殖并诱导细胞凋亡。此外,CCND2是miR-194-5p的直接靶标,而miR-194-5p是由TUG1调节的。过表达CCND2可部分恢复TUG1沉默造成对细胞增殖和顺铂耐药的抑制作用。此外,TUG1在膀胱癌中表达水平与临床分期、淋巴转移和患者预后相关。结论:总之,TUG1通过EZH2相关的miR-194-5p沉默调节CCND2,促进膀胱癌细胞生长和化疗耐药。我们的研究有助于阐明其分子机制,为膀胱癌提供新的治疗靶点和生物标志物。