光敏型亲和沉淀聚合物的设计与制备

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本课题研究以N-异丙基丙烯酰胺(NIPA)、N-羟甲基丙烯酰胺(NAM)、丙烯酸丁酯(BA)、叶绿酸铜钠(CHL)为聚合单体,采用无规共聚法合成了新型光敏感聚合物PNBC,并进一步利用红外吸收,核磁共振对该聚合物进行表征。同时通过粘度法测定聚合物的粘均分子量为3.0×104。该聚合物中叶绿酸铜钠为光敏感单体,对一定光强度的光照刺激敏感,导致聚合物沉淀。通过一定时间的光照,可使聚合物完全沉淀,同时光照回收率达到96%以上。重复循环使用聚合物进行回收实验五次,回收率最均保持在96%-98%的范围内。   将该聚合物PNNBC接上不同亲和配基,用以亲和沉淀不同蛋白质(如牛血清白蛋白、脂肪酶)。本实验中,将该聚合物接上Cibacron Blue F3GA染料配基用于BSA的亲和纯化,得到最佳吸附条件为25℃、pH5.0、初始酶浓度2.0mg/m1,吸附时间120min。在此条件下,吸附剂对BSA的吸附量为5.20mg·g-1聚合物。负载牛血清白蛋白的吸附剂容易洗脱,以1.0mol/L NaSCN作为洗脱剂,洗脱率高达99.2%。另外,将该聚合物接上疏水性配基丁基用于疏水性蛋白脂肪酶的亲和分离纯化,发现在pH=7.0~7.5之间,初始酶浓度在0.5mg/m1时,35℃下振荡吸附120min中,吸附基本上达到平衡,酶的吸附容量达到最大,为24.5mg/g。最后,还讨论了该配基-聚合物对于粗胰酶粉中脂肪酶的分离纯化效果,实验中先对粗胰酶粉进行了一定的预处理,然后进行亲和沉淀,最后经洗脱得到含脂肪酶的蛋白上清液,脂肪酶的纯化倍数可以达到36倍,收率在82%,脂肪酶的比活达到502.6 U/mg,可见用此配基-聚合物分离纯化脂肪酶是可行的。
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