基于硅胶与磁珠的免疫亲和萃取材料的制备与应用研究

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兴奋剂检测是一项难度较大但意义十分重大的工作,它能够维持公平竞赛的环境。目前常用的检测方法主要有液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法和毛细管电泳法等。   兴奋剂的检测工作主要是围绕着人体的血液、尿液、唾液和头发展开的。由于这些样本的成分较为复杂、干扰物质较多,因此给检测工作带来了很大的挑战。在实际过程中,通常需要对样本进行前处理。常用的前处理技术包括:液-液萃取、微波辅助萃取、固相萃取、固相微萃取、超临界流体萃取以及免疫亲和萃取等。在这些方法中,免疫亲和萃取方法的因其特异性高而受欢迎。本研究工作将离线免疫亲和富集与液相色谱相结合,发展了基于硅胶与磁珠的免疫亲和萃取材料检测兴奋剂(表睾酮、吗啡和可待因)的分析方法。   一、基于硅胶的免疫亲和萃取材料检测表睾酮:将表睾酮单克降抗体分别偶联到基于羟基、氨基和聚乙烯亚胺修饰的硅胶材料表面。利用高效液相色谱的紫外检测器,通过三类萃取材料的离线富集,考察了表睾酮掺杂尿液的回收率,比较了三类萃取材料的富集性能。   二、基于金丝的免疫亲和萃取材料的研究:考察了吗啡多克隆抗体单链在金丝表面的偶联,并对基于金丝的免疫亲和萃取材料的富集效果进行了研究。   三、基于磁珠的免疫亲和萃取材料检测表睾酮:将表睾酮单克隆抗体单链偶联到金包裹磁珠的表面。利用高效液相色谱的紫外检测器,通过磁珠的近均相免疫亲和富集前处理,考察了表睾酮掺杂尿液的回收率,比较了用间接竞争-酶联免疫吸附测定法得到的回收率结果。此外,实验还考察了基于磁珠的萃取材料对大体积、低浓度表睾酮样本的回收率。   四、基于磁珠的免疫亲和萃取材料检测吗啡和可待因:将吗啡多克隆抗体单链定向偶联到金包裹四氧化三铁的磁珠表面,通过磁珠的近均相免疫亲和富集前处理,实验利用高效液相色谱.质谱联用的检测手段,考察了基于磁珠的萃取材料对大体积、低浓度吗啡、可待因溶液的回收率。
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