【摘 要】
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胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)是一种具有促进多种细胞生长功能的活性多肽,它对组织细胞的增殖、分化、凋亡,机体的生长发育及肿瘤的发生发展
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胰岛素样生长因子-Ⅰ(insulin-like growth factor-Ⅰ,IGF-Ⅰ)是一种具有促进多种细胞生长功能的活性多肽,它对组织细胞的增殖、分化、凋亡,机体的生长发育及肿瘤的发生发展起重要的调节作用.蛋白质纯化因其操作复杂,纯化条件不易掌握,产率低,阻碍了其产业化生产.所以建立一条相对简单、高效的纯化路线,有利于推动IGF-Ⅰ研究和应用.已构建好的含重组质粒pExSecI-IGF-Ⅰ的E.coli BL21(DE3),经IPTG16℃低温诱导重组蛋白的表达.将离心收集到的菌体超声破壁,离心分离,收集上清液,进行离子交换层析和分子筛分离纯化.蛋白纯度用Tris-Tricine SDS-PAGE鉴定,Western blot检测纯化的重组蛋白的免疫学活性.目的蛋白以可溶形式存在胞浆中,经二步柱层析纯化后,可获得高纯度的rhIGF-Ⅰ.Western blot分析表明分离纯化的蛋白具有免疫学活性.生物信息学分析表明,SARS-CoV除编码四个主要的结构蛋白外,还存在同已知蛋白没有同源性的5个未知蛋白.一些研究表明非结构蛋白在病毒复制及致病中起重要作用.未知蛋白可能在SARS-CoV的致病中具有一定的作用.该论文利用PCR技术,分别构建X1基因和X2基因与绿色荧光蛋白(EGFP)或红色荧光蛋白(RFP)基因的融合表达载体.转染293、PC12、COS7和Vero细胞后,发现X1-荧光融合蛋白位于细胞质中,X2-EGFP融合蛋白位于细胞核.细胞器染色和膜蛋白提取结果表明X1-荧光融合蛋白定位于质膜、内质网和高尔基体等细胞器上.流式细胞仪分析结果表明X1和X2能诱导293和Vero细胞细胞周期阻滞,抑制细胞增殖.AnnexinV-PE和7-AAD双染流式细胞仪检测分析表明,X2蛋白在COS7细胞中的表达能够诱导细胞发生凋亡,提示X2基因的功能可能与细胞凋亡有一定的联系.
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