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DNA的精确复制是基因组稳定性的基础，也是生物体进行生命活动的根本保证。当DNA复制遇到内源或外源压力时，复制叉暂时停顿，此时细胞周期检验点(checkpoint)被激活，暂停细胞周期，通过精密的信号通路调控一系列蛋白来稳定停顿的DNA复制叉，以备压力去除后复制叉能够重新起始DNA合成。当checkpoint不能被正常激活时，停顿的DNA复制叉将会发生倒转，生成“鸡脚爪”结构，进而垮塌、断裂，造成复制无法正常完成和大规模DNA重组，最终导致基因组的不稳定和细胞癌变甚至死亡。 Dna2是参与维持基因组稳定性的一个重要蛋白，作为真核生物中保守的核酸酶，在不同物种的冈崎片段成熟、DNA修复、维持端粒稳定等过程中都起作用。本实验室已发现，裂殖酵母Dna2作为checkpoint通路中Cds1下游底物，通过被Cds1磷酸化从两参与稳定停顿的DNA复制叉。 为验证这一途径在人细胞中的保守性，本文首先通过RNA干扰在U2OS细胞中降低了Dna2蛋白的表达量，采用电子显微镜技术观察并统计到DNA复制叉倒转频率的上升，体内证明了Dna2参与稳定停顿的DNA复制叉这一过程;继而通过一系列生化实验，检测了checkpoint对Dna2与染色质（chromatin）结合情况的影响，发现checkpoint激活时Dna2与chromatin结合略有增加，而checkpoint受抑制Dna2与chromatin结合明显减少;当checkpoint激活时，Chk1功能受抑制引起Dna2与chromatin结合明显减少，进而推测Dna2稳定停顿复制叉的功能受Chk1调控;并进一步尝试了人细胞体系中用高表达载体pCS2进行Dna2的表达。本文的研究结果初步暗示了人Dna2在稳定DNA复制叉过程中的新功能和调控机制，也为进一步理解人细胞checkpoint通路和基因组稳定性、寻找可能的抑癌药物靶点提供了参考。