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C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)与降钙素原(Procalcitonin,PCT)是体外诊断感染性疾病最具代表性的标志物。人体血清CRP水平,与细菌或病毒性感染程度高度相关;PCT作为细菌性感染的特异性诊断指标,还对于脓毒血症的诊断和病情监测意义重大。通过同时检测两种标志物,可在确诊感染的基础上,进一步鉴别细菌性感染和病毒性感染,从而指导抗生素的合理使用。本研究应用免疫荧光侧向层析检测技术,开发一种对超敏CRP(high sensitivity CRP,hsCRP)和PCT进行定量联合测定的方法。首先以免疫荧光侧向层析技术作为测试手段和评价依据,筛选出高效价、高特异性的CRP单克隆抗体配对和PCT单克隆抗体配对。CRP抗体筛选重点在于检测高浓度样本可达到的线性范围;PCT抗体筛选则需关注对低浓度样本可达到的检测灵敏度。以纳米荧光微球作为示踪剂,经交联剂碳二亚胺(EDC)共价桥接一株检测抗体,形成高灵敏度、高稳定性的荧光标记结合物。该结合物与包被于硝酸纤维素膜上的捕获抗体形成双抗体夹心体系,对经样本稀释液预处理的血清样本同步测定hsCRP和PCT,反应全过程可在15分钟内完成,对目的蛋白最低检出限可达皮克级(pg/mL)。检测结果的可靠性依赖于其溯源性的建立,由此分别制定了hsCRP和PCT检测的溯源图,以及一级校准品、二级校准品的制备和校准方案。hsCRP检测溯源至国际临床化学学会(IFCC)CRM-470参考标准;PCT检测溯源至该技术发明方BRAHMS PCT LIA,或经其授权和校准的检测方法罗氏Elecsys BRAHMS PCT。通过标准曲线制定及临床样本测试,验证本课题研究方法可实现hsCRP检测范围为0.1-100mg/L,功能灵敏度达到0.5mg/L,与参考方法测定结果相关性达R2=0.9656;PCT检测范围为0.1-100ng/mL,功能灵敏度达到0.5ng/m L,与参考方法测定结果相关性达R2=0.9589,符合预期研究目标和临床检验的应用需求。