根据文献报道的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甾醇C-22去饱和酶基因(ERG5)的核甘酸序列设计引物，利用酿酒酵母YSF－20的总DNA作为模板进行PCR扩增，获得ERG5基因的编码序列及其终止子序列.并构建了重组克隆质粒pYE5，酶切验证该重组质粒构建正确。　　 以大肠杆菌－酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体，以磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子为上游调控元件构建了酵母菌表达质粒pYPE5。以铜离子螯合蛋白基因(TP1替换ERG5基因内部序列获得ERG5破坏菌株YSE5，其中麦角甾醇的合成被阻断，而积累了甾醇中间体Ergosta－5，7－dien－3β－ol。表达质粒pYPE5转化破坏菌株后使细胞恢复了合成麦角甾醇的能力。说明表达质粒上的ER65基因得到了功能性的表达。将表达质粒pYPE5转化酿酒酵母单倍体菌株YS58，通过营养缺陷互补筛选到重组菌株YS58(pYPE5)。对重组菌株、破坏菌株和互补菌株细胞甾醇组分和含量进行测定，发现重组菌株和互补菌株的总甾醇含量略低于对照菌YS58(YEp352)，麦角甾醇含量明显低于对照菌，但重组菌株中中间体甾醇含量略高于对照菌。　　 测定不同培养时间细胞的麦角甾醇含量，发现重组菌株的麦角甾醇含量始终低于对照菌YS58(YEp352)。可见，ERG5在酵母中的高表达导致细胞麦角甾醇含量降低。　　 根据文献报道的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)甾醇C－5去饱和酶基因(ER63)的核甘酸序列设计引物，利用酿酒酵母YSF-20的总DNA作为模板进行PCR扩增，获得ERG3基因的编码序列及其终止子序列，并构建了重组克隆质粒pME3，酶切验证该重组质粒构建正确。　　 以大肠杆菌－酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体，以磷酸甘油酸激酶基因PGK1启动子为上游调控元件构建了酵母菌表达质粒pYPE3。以铜离子螫合蛋白基因CUP1替换ERG3基因内部序列获得ERG3破坏菌株YSE3。将表达质粒pYPE3转化酿酒酵母单倍体菌株YS58，通过营养缺陷互补筛选到重组菌株YS58(pYPE3)。本工作正在进行中。