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目的(1)研究胚胎中脑腹侧神经干细胞(Mesencephalic NSCs, mNSCs)移植对帕金森病(Parkinson Disease, PD)的治疗作用。(2)以SDF-1/CXCR4信号转导为切入点,初步探讨MNSCs移植治疗PD的分子机制。方法(1)解剖分离E14d大鼠胚胎中脑腹侧组织,以无血清神经干细胞培养液培养,观察其增殖、分化。对培养的细胞进行神经干细胞特性和分化潜能的免疫细胞化学鉴定。(2)黑质、内侧前脑束立体定向注射6-羟多巴胺(6-OHDA),建立帕金森病的大鼠模型。(3)将建模成功的PD大鼠随机分为四组：对照组(不移植神经干细胞也不注射AMD3100)；神经干细胞移植组;神经干细胞移植+AMD3100组；AMD3100组。(4)选取培养第3代的神经干细胞,采用立体定向技术移植到神经干细胞移植组和神经干细胞移植+AMD3100组PD大鼠模型的黑质、内侧前脑束。(5)移植后每天给神经干细胞移植+AMD3100组和AMD3100组腹腔注射CXCR4阻断剂AMD3100(1.25mg/kg/天)。(6)移植MNSCs后1W,2W,3W和4W分别腹腔注射lml APO (0.2mg/ml)诱导大鼠旋转,然后对各组PD大鼠进行行为学评分。(7)于细胞移植后的1W,2W和4W分别处死各实验组大鼠,用TRIzol (Invitrogen)抽提患侧脑组织总RNA,进行RT-PCR以检测患侧脑内SDF-1和CXCR4的基因表达。(8)于细胞移植后的1W、2W和4W分别处死各实验组大鼠,通过Western Blot检测患侧脑内SDF-1和CXCR4的蛋白表达。(9)所有计量数据以均数±标准差(x±s)表示,采用SPSS17.0软件对结果进行统计学分析,计量资料采用单因素方差分析,P<0.05表示差异具有统计学意义。结果(1)从E14d胎鼠的中脑腹侧分离得到的神经干细胞具有增殖和形成神经球的能力,体外培养第7天的MNSCs免疫细胞化学表达Nestin阳性,经体外分化培养基培养7d的胚胎中脑腹侧神经干细胞RT-PCR和TH免疫细胞化学结果显示MNSCs分化后可表达多巴胺神经元特异性分子标志物。(2)注射6-OHDA制备PD动物模型成功且具有较长时期的稳定性,行为学评分没有出现自我恢复的现象。(3)与其他各组(对照组；神经干细胞移植+AMD3100组；AMD3100组)相比,神经干细胞移植组PD模型大鼠1W、2W、3W和4W经APO诱导旋转和行为学都有显著改善。AMD3100注射组与神经干细胞移植+AMD3100注射组在1W、2W、3W和4W后经APO诱导旋转行为结果表明,与对照组比较没有显著变化。(4) RT-PCR和Western Blot结果显示基因转录水平与蛋白表达水平发生了一致性变化,表明神经干细胞移植组SDF-1、CXCR4基因与蛋白表达水平升高和其他组间出现了显著差异。结论(1) MNSCs移植可以显著改善PD大鼠模型运动障碍。(2) MNSCs移植治疗PD有效,其机制与上调SDF-1的表达和激活SDF-1/CXCR4通路密切相关。