【摘 要】
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本研究以湖南、广西和广东等地选出的油茶优良无性系为材料，对采集到的40个样品进行了适用于AFLP分析的DNA提取和纯化方法的研究，AFLP分析体系的建立和优化以及引物的筛选。获
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本研究以湖南、广西和广东等地选出的油茶优良无性系为材料，对采集到的40个样品进行了适用于AFLP分析的DNA提取和纯化方法的研究，AFLP分析体系的建立和优化以及引物的筛选。获得的主要结果如下：
1.以油茶的成熟叶片为材料提取DNA，40个样品用改良的提取纯化方法成功提取出适用于AFLP分析的高质量DNA，OD260/OD280在1.7-2.0之间，可以用于AFLP反应。该方法打破了仅能用幼嫩叶片作为提取材料的限制，具有更广泛的适用性和重要的实用性。
2.本试验通过对样品AFLP反应体系及程序中影响因素的分析，建立和优化了AFLp反应体系及程序：在30μl酶切体系中，采用EcoR I和Mse I双酶切，37℃，6 h；40 μl连接体系，22℃，10 h以上或过夜，连接产物稀释20倍，-20℃保存。20μl预扩增体系中加入稀释20倍的连接产物5 μl，95℃预变性4 min，95℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸2 min，30个循环，预扩增产物稀释30倍用于选择性扩增；25 μl选择性扩增体系中加入2 μl稀释30倍的预扩增产物，95℃预变性4 min，从65℃开始，相差0.7℃梯度降温，每梯度45 s，55.9℃退火45 s，72℃延伸2 min，13个循环，再95℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸2 min，24个循环；选择性扩增产物，加5 μl Loading Buffer，95℃变性5 min，立即冰浴；在6％变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳，银染法检测PCR产物，或用2％～3％的琼脂糖凝胶电泳检测。
3.从E-ACT、M-CAA等64对3×3随机引物中筛选出4对扩增多态性较高，带型较清晰的引物组合。筛选出的4对引物组合为M-CAT+E-AAC，M-CAA+E-ACG，M-CAG+E-AAC和M-CTA+E-AAC。
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