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目的：构建靶向Nrf2基因的siRNA真核表达重组载体，转染H9c2心肌样细胞，利用缺氧/复氧(H/R)损伤模型及缺氧预适应（HPC）延迟保护模型，从Nrf2-ARE信号通路的角度，探讨HPC上调抗氧化酶（HO-1、MnSOD）介导心肌细胞延迟保护的新途径。方法：1.利用siRNA真核表达载体pGPU6/GFP/Neo，设计并构建靶向Nrf2的RNA干扰重组质粒pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA，同时设计并构建阴性对照RNA干扰重组载体，用于鉴定pGPU6/GFP/Neo质粒介导的RNA干扰体系的特异性；2.通过Western Blot法分别检测H9c2心肌样细胞经HPC处理后0、12、24、48、72h各时间点的Nrf2核转位变化；并在Nrf2核转位最显著的时间点，应用染色质免疫共沉淀（ChIP）法检测胞核内Nrf2与HO-1及MnSOD基因启动子区内抗氧化反应元件（ARE）结合的变化；3. H9c2细胞经pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA重组载体或阴性对照载体pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA瞬时转染24h后，建立HPC延迟保护模型。实验处理后，通过Western Blot法分别检测核内Nrf2蛋白表达以及胞内HO-1、MnSOD蛋白表达的变化；4. H9c2细胞经pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA重组载体或阴性对照载体pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA瞬时转染24h后，分别建立H/R损伤及HPC延迟保护模型。实验处理后，MTT法检测各实验组心肌细胞存活率；根据试剂盒说明分别检测各组细胞内LDH的漏出量，应用比色法测定MDA含量以及SOD、CAT、GPx等抗氧化物酶的活性；流式细胞术检测细胞内活性氧（ROS）含量的变化。结果：1.经基因测序证实，成功构建了Nrf2siRNA真核表达重组质粒pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA及阴性对照载体pGPU6/GFP/Neo-NC siRNA。此外，经Western blot检测证实该质粒瞬时转染H9c2细胞24h后，胞内Nrf2蛋白表达显著下调。2. H9c2心肌样细胞经HPC处理后12h，Nrf2核转位开始增加，HPC后24h达到峰值，而HPC后72h回到基础水平。可见，HPC诱导Nrf2核转位变化与HPC延迟保护出现的时间窗相一致；同时，ChIP法证实HPC后24h，Nrf2在胞核内与HO-1及MnSOD基因启动子区内ARE的结合均明显增加。3. H9c2心肌样细胞经HPC处理后24h，核内Nrf2蛋白表达及胞内抗氧化酶HO-1、MnSOD的蛋白表达水平显著增加，与相应的Control组比较均有显著性差异（p<0.01）。然而，预先瞬时转染Nrf2siRNA表达载体后，HPC上述效应被逆转。4. H9c2心肌样细胞经HPC处理后24h，可显著提高H/R损伤心肌细胞的生存率，抑制LDH的活性；并能显著减少H9c2心肌细胞H/R过程中所产生的活性氧，同时增加内源性抗氧化酶（SOD，GPx，CAT）活性，并减少MDA的生成，在细胞水平上进一步证明了HPC能对抗H/R所诱发的氧化应激，产生延迟保护作用。然而，预先瞬时转染Nrf2siRNA表达载体后，HPC上述效应均被逆转。结论：1.成功构建了Nrf2siRNA真核表达重组质粒pGPU6/GFP/Neo-Nrf2siRNA，为进一步研究Nrf2信号通路在HPC心肌延迟保护中的作用奠定了基础。2HPC可以通过激活Nrf2-ARE信号通路，上调抗氧化酶MnSOD及HO-1蛋白表达，对抗H/R引起的氧化应激损伤，发挥心肌延迟保护作用。