防治白菜根肿病的功能细菌筛选与应用

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白菜根肿病是由芸薹根肿菌(Plasmodiophora brassicao)侵染引起的一种土传病害,危害面积大、造成的损失严重。目前的防治措施以化学防治为主,生物防治因其环保、安全而备受青睐。本文围绕白菜根肿病的生物防治,筛选兼具拮抗、促生、诱导抗性功能的生防细菌,分析其促生、诱导抗性机制,并通过温室试验、田间试验评估候选生防菌的防效,论文获得以下主要结果:1.以白菜地上生物量为指标从白菜根际土壤中筛选到12株促生菌,这12株菌株均能增加白菜地上部分鲜重,干重,株高,叶长。通过Blast比对和系统发育分析,这12株细菌分别属于:Bacillus siamensis AN.01,Alcaligenes faecalis subsp.phenolicus AN.02,Bacillus methylotrophicus AN.09,Bacillus endophyticu AN.11,Bacillus licheniformis AN.10和Bacillus amyloliquefaciens AN.03、AN.04、AN.05、AN.06、N.07、AN.08、AN.12。在筛选的菌株中,菌株AN.04、AN.05、AN.12都表现出了产铁载体、溶磷、固氮功能。菌株AN.09、AN.11表现出产IAA能力;只有菌株AN.02表现出产ACC脱氨酶能力。2.以白菜防御酶过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性提高为指标,筛选出4株诱导抗性菌株,分别为:A.faecalis subsp.phenolicus AN.02,B.licheniformis AN.10,B.amyloliquefaciens AN.05和B.amyloliquefaciens AN.08。通过RT-PCR技术分析细菌诱导下SA、JA、ET信号途径中的相关基因(AOS,PDF1.2,TGA,PR1,PR2,ETR和CTR1)的表达,结果表明菌株A.faecalis subsp.phenolicus AN.02主要通过JA/ET信号途径使白菜获得抗性,其他三株菌株通过水杨酸(SA)、茉莉酸/乙烯(JA/ET)信号途径使白菜获得抗性。3.通过平板对峙法和牛津杯法测定了12株促生菌(AN.01-AN.12)对病原菌Pestalotiopsis sp.和Fusarium oxysporum的菌丝生长抑制率。发现筛选的促生菌对病原真菌生长均表现出较强的拮抗性,抑制率在25%-68%之间。以抑制卵孢子萌发为靶标,发现菌株A.faecalis subsp.phenolicus AN.02,B.amyloliquefaciens AN.07,B.amyloliquefaciens AN.08,B.methylotrophicu AN.09,B.licheniformis AN.10对休眠孢子萌发具有较强抑制性。4.选取5株兼具促生,诱导抗性和拮抗病原真菌的生防细菌,通过温室和田间试验测定生防菌对白菜根肿病的防治效果。温室试验结果表明,菌株B.amyloliquefaciens AN.05,B.amyloliquefaciens AN.08和菌株A.faecalis subsp.phenolicus AN.02对白菜根肿病防治效果最佳,防效分别为63.64%,67.24%,69.67%;田间试验时这3株菌株亦表现出较好的防效,分别达到56.74%,60.02%,63.96%防治效果。供试菌株均能提高白菜地上植株鲜重,其中B.amyloliquefaciens AN.05处理下增产高达85.72%。
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