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肌肉发育过程是一个十分复杂的进程,在其发育过程中受到了很多基因及转录因子的调控。由于肌肉发育的复杂性,虽然现在已经确定了一批对肌肉发育有调控作用的调控因子,但仍有很多与肌发育相关的基因或转录因子有待研究。有研究报道,Mybph基因在肌肉发育过程中差异性表达,而且会与其它转录因子共同作用调控肌肉发育。因此,为了验证Mybph基因对肌细胞的调控作用,我们检测了猪不同组织中Mybph基因的相对表达情况;通过生物信息学对Mybph蛋白表达位置进行预测,并使用激光共聚焦技术进行验证;检测Mybph基因在C2C12细胞分化过程中的时空表达;构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-Mybph和合成Mybph基因的干涉片段,转染C2C12细胞,通过实时无标记细胞分析技术(RTCA)、免疫荧光技术、western blot、流式细胞术、荧光定量PCR技术等分析Mybph基因对肌细胞生长的影响。主要研究结果如下:1.运用RT-PCR技术检测了猪心、肝、脾、肺、肾、背肌、卵巢、子宫内膜、垂体和下丘脑等10个组织中Mybph基因的表达量。结果显示,Mybph基因在各组织都有表达,在背肌中表达量最高,在其余组织的相对表达量较低。2.利用生物信息学的方法对Mybph蛋白在细胞中的表达位置进行预测,发现Mybph蛋白有98.5%的可能是在细胞质表达,只有1.5%的可能性在细胞核表达。此外,通用激光共聚焦技术对Mybph蛋白在肌细胞中的表达位置进行了验证,结果显示,Mybph蛋白在细胞质表达,与生物信息学预测相吻合。3.利用RT-PCR方法检测Mybph基因在C2C12细胞分化过程中的时空表达情况,结果显示,随着细胞分化,相对表达量升高。4.利用RT-PCR技术检测上调/下调Mybph基因对肌细胞分化相关基因Myog、Myhc和Myomaker相对表达量的影响。结果显示,上调Mybph基因使得肌细胞分化相关基因的相对表达量总体下降,下调Mybph基因使得肌细胞分化相关基因的相对表达量总体上升。5.运用实时无标记细胞分析技术检测上调/下调Mybph基因对C2C12细胞增殖的影响,发现上调Mybph基因能够抑制细胞数目的增殖,下调Mybph基因能够促进细胞的增殖。6.使用免疫荧光技术和western blot技术在蛋白水平检测上调/下调Mybph对细胞增殖标记蛋白Ki67表达量的影响。结果发现,上调Mybph基因能够抑制Ki67的表达,下调Mybph基因能够促进Ki67的表达。7.运用流式细胞术检测上调/下调Mybph基因对C2C12细胞周期的影响,结果显示,Mybph参与了细胞周期的调节,上调Mybph会使得更多细胞停留在G1期,下调Mybph会使得更多细胞停留在G2期和S期。