第一部分 MKP-1通过抑制MAPK/ERK通路改善AD小鼠突触和认知功能研究　　目的:丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶-1（Mitogen-activated protein kinase phosphatase-1, MKP-1）对MAPK信号通路具有显著的抑制作用，而MAPK在AD发生中参与了Aβ的沉积，tau的过度磷酸化，神经元的凋亡等过程。然而，MKP-1是否通过抑制 MAPK信号通路在AD发病中发挥重要的作用，尚不清楚。因此，本研究旨在探索MKP-1在AD病理发生发展过程中的作用及相关的分子机制。　　方法:在6月龄APP/PS1双转基因AD模型小鼠侧脑室定位注射MKP-1过表达及干扰病毒　　1.行为学测试：6个月后（12月龄）采用Morris水迷宫检测小鼠学习记忆功能；　　2. Western blotting：完成行为学实验后，取海马组织，通过Western blotting检测MKP-1的表达，APP及其剪切产物C89和C99，以及APP代谢相关的分泌酶BACE1和PS1等；　　3.实时荧光定量PCR：Q-PCR检测APP和BACE1以及MKP-1的mRNA水平。　　4. ELISA检测Aβ40和Aβ42的生成；　　5.透射电镜：戊二醛灌流固定后，电镜检测海马CA1区突触结构；　　6.离体电生理：膜片钳记录检测海马CA1区LTP改变；　　7.荧光素酶报告基因：荧光素酶检测 MKP-1对 APP和 BACE1启动子活性的影响；　　结果:与WT相比，AD小鼠海马内的MKP-1无论在mRNA水平还是在蛋白水平，表达均显著降低。通过侧脑室定位注射AAV过表达MKP-1，改善了 AD小鼠的学习和记忆以及海马 LTP。透射电镜提示MKP-1过表达显著增加 AD小鼠海马区域的突触数量。荧光素酶和Western显示MKP-1过表达可以通过抑制APP和BACE1启动子的活性，从而减少APP和BACE1的表达，而这个减少主要是通过MKP-1抑制MAPK/ERK通路发挥作用。　　结论:本研究发现MKP-1随着AD的进程，表达逐渐降低，通过AAV过表达MKP-1可以明显改善AD小鼠的认知功能、海马突触结构及可塑性。同时发现MKP-1通过降低APP和BACE1启动子活性，减少其mRNA表达，进而减少老年斑的形成。这一研究表明，MKP-1可能通过抑制MAPK/ERK信号通路改善AD小鼠的突触和认知功能，从而为临床治疗AD提供新的靶点。　　第二部分人参皂苷Rf对Aβ诱导细胞毒性保护作用研究　　目的:人参作为中国传统药材已有2000多年历史，而人参皂苷Rf则是一种人参提取物，主要发挥抗炎功能，炎症是AD主要原因之一，那么Rf是否能通过抗炎而减缓AD的发病过程即本实验目的所在。　　方法:用Rf处理N2A-APP细胞以及Aβ诱导过的N2A细胞　　1. Western blotting：细胞裂解液用来检测Rf对Aβ引起的炎症以及细胞凋亡相关因子caspase-1和caspase-3，以及APP产生Aβ的相关分泌酶，APP、BACE1及PS1的表达变化；　　2. ELISA：检测Aβ40和Aβ42的生成；　　3.流式：流式检测细胞内Ca2+，线粒体膜电位以及活性氧ROS；　　4.Q-PCR:实时荧光定量检测炎症相关因子IFN-γ和IL-13 mRNA。　　结果:与正常细胞相比，Aβ处理细胞后细胞凋亡和炎症显著增加，而Rf可以显著减少Aβ引起的细胞凋亡，如细胞内Ca2+的浓度以及活性氧ROS，线粒体膜电位MMP和磷酸化caspase-3显著降低；同时Rf可以减轻Aβ引起的炎症反应，如活化的caspase-1及IFN-γ显著增加而IL-13显著降低；Rf还可以通过增加Aβ的降解从而减少Aβ的含量。　　结论:以上研究表明，Rf通过减轻Aβ引起的炎症和细胞凋亡从而起到神经保护的作用，为AD的防治提供了新的药物靶点。