【目的】从正常人肝组织中克隆nm23-H1cDNA基因，构建腺病毒载体，为研究nm23-H1的生物学活性、突变特性及肿瘤基因治疗打下实验基础。 【方法】应用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术，从正常人肝组织中扩增出nm23-H1cDNA，并将其连接到质粒pMD18-T上，经酶切鉴定、核苷酸序列测定，设计突变引物，进行PCR重叠延伸点诱导突变，克隆基因序列在Genbank上比较。与腺病毒穿梭质粒正向连接，构建腺病毒载体。 【结果】在正常人肝组织中克隆得到的nm23-H1cDNA片段经测序、比较，发现两个核苷酸与已知基因序列不同：213位胞嘧啶突变为胸腺嘧啶(213C→T)，217位胞嘧啶突变为胸腺嘧啶(217C→T)。对应氨基酸发生突变：71位G甘氨酸变为A丙氨酸，73位的V缬氨酸变为I异亮氨酸。作PCR重叠延伸点诱导突变，克隆的基因经测序鉴定，与已知nm23-H1cDNA编码区基因100％符合，以此基因成功构建正向腺病毒穿梭质粒载体。 【结论】1．成功克隆出中国人nm23-H1cDNA基因，测序结果在基因库中比较，有两个核苷酸不同，无类似报道。2．采用PCR重叠诱导突变策略，设计引物，成功诱导突变，构建出pMD18-nm23-H1质粒载体。3．利用分子克隆技术，成功构建出正向重组腺病毒穿梭质粒载体。