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目的:
本实验用加味青蒿鳖甲汤的含药血清和相关细胞因子共同体外培养,将从完全缓解期的急性髓系白血病(AML-CR)患者骨髓中分离出的CD34+细胞,诱导生成树突细胞(DC),观察DC诱导培养的不同阶段观察各组血清中IL-2、sIL-2R的含量变化,探讨加味青蒿鳖甲汤对IL-2、sIL-2R的影响及及加味青蒿鳖甲汤诱导DC的机理。
方法:
将AML-CR骨髓经Ficoll密度梯度离心获得骨髓单个核细胞(BMNC)后,用免疫磁珠阳性选择法提取CD34+细胞,经细胞因子(SCF、TPO、FL、IL-3)体外扩增后,用含10%FCS的RPMI1640培养液调整CD34+细胞浓度后加入6孔板中培养9天,2~3天换液1次,以不同浓度中药含药血清与细胞因子(GM-CSF、IL-4、IFN-α、TNF-α)、细胞因子组、空白血清组、小牛血清组分别培养;在培养的第0天、第6天和第9天用ELISA法分别检测各组血清中IL-2、sIL-2R的含量,并在培养过程中观察细胞的形态、拍照。9天后流式细胞仪检测DC表面免疫分子CD83、CD80、CD86、CDla、HLA-DR的表达。
结果:
1.DC的形态:倒置显微镜下观察,第3天均可见细胞成簇并形成散在的集落,体积变大,半悬浮生长;第6天多数细胞悬浮,集落增多,细胞呈多形,一部分细胞可见少量短刺突出细胞表面;第7天细胞胞体较前进一步增大,周围短刺较前明显,并且增多;第9天典型的DC已经形成,胞体外周树突变长,分支增多。各中药联合细胞因子组诱导DC形态上比细胞因子组要典型,突起较多、较明显;各中药组之间无明显差别;小牛血清组、空白组则无典型DC细胞形态。
2.IL-2的含量比较:各中药联合细胞因子组第9天、6天含量均高于第0天,JWZ组第9天的含量明显高于第6天(P<0.01),JWG组第9天的含量高于第6天(P<0.05);在同一时间内,各中药联合细胞因子组IL-2的含量均高于空白组。
3.sIL-2R的含量比较:各中药联合细胞因子组第9天含量均明显低于第0天、第6天(P<0.01),JWG组第6天低于第0天(P<0.05),其余各组第6天与第0天无统计学差异,但数值均低于第0天;在同一时间内,各中药联合细胞因子组sIL-2R的含量均低于空白组。
4.各中药组内以加味青蒿鳖甲汤中剂量组效果最为明显,是否中剂量是最适宜浓度,有待进一步研究。
结论:
加味青蒿鳖甲汤在促进AML-CR患者骨髓CD34+细胞向DC转化过程中同时促使DC高分泌IL-2,并抑制sIL-2R的生成。加味青蒿鳖甲汤促进血清IL-2水平的升高和sIL-2R的降低可能是该方促进CD34+细胞向DC转化的机制之一。