羊口疮是病毒在感染绵羊和山羊后,引起的一种接触性传染病,在我国西部地区是主要的发病地区,病畜的口、鼻、乳房等部位有脓包、结痂形成,已成为我国家畜疫病防控中一种重要的病原,并受到国内外学者的广泛关注。羊口疮病毒(Orf virus,ORFV)编码Bcl-2样蛋白—ORFV125,由于ORFV125的3D结构及其结构域与Bcl-2家族蛋白高度相似,而Bcl-2在抑制细胞凋亡的调控中发挥重要作用,故本研究的目的是为了验证ORFV125是否具有抑制细胞凋亡的作用。在研究中根据NCBI网站下载ORFV12洛阳株序列,将其ORFV125全基因连接至pCAGGS载体,在公司合成重组质粒pCAGGS-ORFV125与其结构域的突变体质粒,将ORFV125及其突变体在转染到PK-15细胞中培养48 h,把样品用JC-1染料染色处理后的细胞在荧光显微镜下观察,结果可以观察到有些细胞呈现出绿色荧光,说明线粒体膜电位发生了改变。通过酵母双杂交初步筛选出与ORFV125互作的蛋白,再用(Co-Ip)方法验证了ORFV125与抑制细胞凋亡蛋白Birc5相互作用,免疫共沉淀结果显示了在NC上膜上出现ORFV125与Birc5相互作用的蛋白印迹。将ORFV125及其突变体质粒转染到293T细胞中分别按24 h和72 h两组进行培养,同时设正常细胞为对照组;胰酶消化液处理各组细胞,先后用Annexin V-FITC和PI染色,通过流式细胞仪检测样品。结果显示,培养24 h的对照组细胞早期凋亡率为22.65%,晚期凋亡为5.51%;同时间点的试验组细胞早期凋亡率低于5%,晚期凋亡率低于6%。培养72 h的对照组细胞早期凋亡率为32.06%,晚期凋亡率为3.22%;同时间点的试验组细胞早期凋亡率在24.62%-48.29%,晚期凋亡率为2.12%-3.68%。上述研究初步证明了ORFV125能够与抑制细胞凋亡蛋白Birc5互作,验证了ORFV125蛋白能够抑制细胞凋亡。进一步证明了ORFV125及其突变体转染到细胞后有抑制细胞凋亡的作用,并随着凋亡时间的持续凋亡效果更加明显。