本研究以奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌临床分离株J581为研究对象,应用单因素及正交优化试验,对四种培养基进行了筛选,培养条件进行了优化。利用透射电镜,对优化前后条件下培养的细菌荚膜情况进行了比较观察。培养基筛选结果表明,哥伦比亚液体培养基最适合金黄色葡萄球菌的生长,与培养条件优化前相比,菌体产量提高了20%,且增加了有荚膜菌体的数量和荚膜厚度。对通过细菌发酵液吸光度预估菌液活菌数方法进行了研究,开展了J581株对小鼠致病性的研究。试验成功构建了通过菌液吸光度预估活菌数方法,得出金黄色葡萄球菌对小鼠的半数致死量为4.83×108CFU。发酵液经离心后,采用高压裂解法从菌体沉淀中提取多糖,并利用苯酚抽提法去除蛋白。结果,从6L发酵液中获得含28.15%的多糖共1.534 g,经苯酚抽提后,蛋白质含量为3.44%。将提取的荚膜多糖粗提物,采用琼聚糖凝胶柱进行了荚膜多糖纯化,纯化后的多糖经溴化氰活化后与己二酰肼(ADH)形成多糖-酰肼基衍生物,在碳二亚胺(EDAC)作用下与破伤风类毒素共价进行结合。利用紫外全波长扫描,对多糖蛋白偶联情况进行了鉴定,同时将偶联物冻干,注射用盐水溶解制得金黄色葡萄球菌多糖蛋白结合疫苗。结果表明:经琼聚糖凝胶CL-4B纯化冻干后,测得荚膜多糖的终产量为34.79 mg/L,蛋白含量为0.74%,核酸含量为0.92%,唾液酸含量为12.29%。与多糖最大吸收峰相比,偶联物的吸收峰发生了偏移,表明多糖蛋白偶联成功。制备出了荚膜多糖蛋白结合疫苗。本项研究建立了金黄色葡萄球菌最佳的培养条件和荚膜多糖提取、纯化工艺流程,制备出了奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌荚膜多糖蛋白结合疫苗,为今后进一步深入开展乳房炎疫苗研究,很好的预防奶牛乳房炎具有重要的意义。