【摘 要】
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HLH蛋白对细胞的生长分化起重要的调控作用.MyoD家庭是一类bHLH(baisc helix-loop-helix) 蛋白,调控骨骼肌的终末分化过程.它的碱性区负责和DNA结合,而HLH结构域与二聚体形成
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HLH蛋白对细胞的生长分化起重要的调控作用.MyoD家庭是一类bHLH(baisc helix-loop-helix) 蛋白,调控骨骼肌的终末分化过程.它的碱性区负责和DNA结合,而HLH结构域与二聚体形成有关.MyoD蛋白和组织广泛表达的E2A蛋白形成异源二聚体,结合到肌肉特异基因启动子和增强子E-盒子(CANNTG)上而激活其表达.同时,MyoD还导致不依赖于分化过程的生长抑制,这被认为是MyoD激活p21表达的结果.Id家庭(dnHLH)是另一类HLH蛋白,它缺乏结合DNA的碱性区,通过和其他bHLH蛋白结合而抑制其功能.该实验目的在于观察Id基因对C2C12成肌细胞生长分化的影响并探讨其可能的作用机制.首先重组了含Id基因的逆转录病毒载体,用病毒上清感染C2C12细胞,获得稳定表达Id基因的细胞株.用RNA狭缝杂交检测Id基因的表达,用Western蛋白印迹检测p21蛋白的表达.实验结果表明:Id基因在增殖的成肌细胞中高水平表达,诱导分化后其表达迅速下降;Id基因抑制C2C12细胞的分化.稳定表达Id基因的C2C12细胞与对照相比,在生长培养基中其增殖速率无明显改变,而在低血清的分化培养基中,Id基因能促进细胞增殖;随分化的开始,细胞退出周期,p21的表达水平上调;稳定表达Id基因的C2C12细胞中,Id1基因在分化培养基存在时抑制了p21的表达而促进细胞增殖.
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