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目 的肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，手术仍是治疗原发性肾癌唯一有效的方法。近年来，某些实体肿瘤的化学药物治疗已经取得长足进步，但现有的化学药物和放射治疗对肾癌疗效不明显，大宗病例统计化学药物治疗肾癌的总反应率仅6%。故应进一步探索有效的肾癌治疗方案。20世纪90年代，我国学者成功应用三氧化二砷（arsenic trioxide，As2O3）治疗复发性急性早幼粒细胞白血病（acute promyelocytic leukemia, APL），引起了国内外医学界的极大兴趣。对于As2O3的抗癌作用的研究，已经从血液系统肿瘤进入实体肿瘤。但关于As2O3对肾细胞癌的药理作用和抗肿瘤机制的研究罕见报道。本课题选择人肾癌786-0细胞系为实验对象，研究As2O3对786-0细胞的抑制作用及其分子机制，为临床应用As2O3治疗肾癌提供理论依据。方 法 与 结 果第一部分 采用细胞培养、光学显微镜、电子显微镜、MTT和肿瘤细胞克隆形成等方法观察As2O3处理前后786-0细胞生长和细胞形态学的改变、用免疫细胞化学方法检测As2O3处理前后786-0细胞PCNA和ki67蛋白表达的变化。2.0μmol/L以上浓度As2O3可显著抑制786-0细胞的增殖、降低细胞核分裂指数(P <0.01)，使786-0细胞内PCNA和ki-67蛋白表达降低(P<0.05)，肿瘤细胞克隆形成明显减少，其作用随药物浓度升高和时间延长而增加。第二部分 采用细胞培养、FCM观察As2O3作用786-0细胞后细胞周期的改变，用免疫组化检测As2O3致细胞Cyclin蛋白和CDKI基因的改变，RT-PCR检测Egr-1的改变。以2.0μmol/L或5.0μmol/LAs2O3作用786-0细胞<WP=9>24h、48h、72h，使其细胞周期停滞于G2/M和G0/G1期，周期素蛋白CyclinA、B1、D1、E表达均不同程度降低(P<0.05)，而其CDKI基因p16、p21WAF!、p27CIPI表达升高(P<0.05)，Egr-1在2.0μmol/L As2O3处理786-0细胞0.5 h后，开始表达，并随时间延长而增加，4 h达高峰后下降，24 h后消失。第三部分 采用细胞培养、形态学观察、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞技术（FCM）和TUNEL技术等方法观察As2O3诱导786-0细胞凋亡，用免疫细胞化学和RT-PCR技术等检测凋亡相关基因p53、bcl-2、c-myc及c-fos的mRNA和蛋白表达的改变。2.0μmol/L以上浓度As2O3作用786-0细胞24h后开始发生细胞凋亡，出现凋亡的形态学改变、DNA片段化和特征性亚二倍体峰（凋亡峰），使786-0细胞内p53活性升高(P<0.05)，而bcl-2、c-myc和c-fos基因表达降低(P<0.05)。第四部分 采用免疫细胞化学方法检测As2O3处理前后786-0细胞VEGF、nm-23、MMP-9、TIMP-1蛋白表达的改变；RT-PCR分析TGF-β1、TβR-I和TβR-II mRNA表达的改变。2.0μmol/L As2O3处理肾癌786-0细胞系72h后可显著抑制786-0细胞中VEGF、MMP-9的蛋白表达(P <0.01)，而促进786-0细胞中TIMP-1和nm-23蛋白的表达(P<0.05)。786-0细胞中缺乏TβR-II mRNA，As2O3处理后，786-0细胞中TGF-β1和TβR-I mRNA表达无改变（P>0.05）。第五部分 采用免疫细胞化学、ISH、Western blot和EMSA等技术检测肾癌组织和As2O3作用786-0细胞前后的p65 mRNA含量、NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白的表达。结果肾癌组织中NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白表达量升高(P <0.01)，但IκBα蛋白明显降低(P <0.01)；经2.0μmol/L浓度As2O3处理 786-0细胞72 h后，p65 mRNA含量、NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白的表达量均降低(P <0.01)。结 论1． As2O3通过降低786-0细胞内PCNA和ki-67蛋白的表达，肿瘤细胞克隆形成明显减少，对786-0细胞具有显著的增殖抑制作用，并具有浓度和时间依赖<WP=10>性特点；2． As2O3通过降低CyclinA、B1、D1、E蛋白的表达和增强p16、P21WAF!、p27CIPI活性，将786-0细胞阻滞于G2/M和G0/G1期；3． As2O3可能通过增加p53基因的表达和下调其bcl-2、c-myc和c-fos基因表达诱导人肾癌786-0细胞凋亡；4． As2O3通过抑制VEGF和MMP-9的蛋白表达，增加TIMP-1和 nm-23蛋白的表达，抑制786-0细胞的血管生成和转移；5． NF-κB DNA结合活性及p65、IKKα/β和ICAM-1蛋白增加可能与肾癌的发生和进展有关，2.0μmol/L以上浓度As2O3可以全面抑制786-0细胞中p65、IKKα/β、IκBα和ICAM-1蛋白和p65 mRNA的表达，抑制NF-κB DNA结合活性，可能是As2O3抑制786-0细胞增殖并诱导细胞凋亡的另一种机制。总之，As2O3通过抑制786-0细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡、抑制血管生成和NF-κB信号传递通路的激活等多种途径，发挥对肾癌786-0细胞的抑制作用，NF-κB可能成为抗肾癌治疗的新靶点。