鱼腥草素同系物对枯草杆菌抗菌机理研究

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鱼腥草(Houttuynia Cordata Thunb)的主要有效成分为鱼腥草素,化学名称为癸酰乙醛,有抗菌消炎、抗病毒、增强机体免疫的作用。但是由于癸酰乙醛不溶于水,而且性状不稳定,所以就以癸酰乙醛为模型化合物,合成了一种既有一定水溶性又稳定,而且抗菌活性不变的“癸酰乙醛亚硫酸盐”使用,称之为合成鱼腥草素(HOU-C_n)。合成鱼腥草素对多种革兰氏阳性菌有明显的抑制作用,并且在临床上得到了广泛使用。但是机理尚不清楚,本实验以合成鱼腥草素同系物(HOU-C_n,n=8,10,12)为模型化合物,以枯草杆菌为微生物模型,系统的研究了HOU-C_n对G~+的抗菌作用,以期获得其抗菌机理。本论文主要内容如下:1 HOU-Cn对枯草杆菌形态的影响扫描电镜(Scanning electron microscope,SEM)表明,在细菌的生长期,HOU-Cn可以抑制细菌糖被层的合成,并更进一步的使细菌表面的糖被层消失从而让细菌得不到有效地保护和营养。糖被层仅能在细菌外壁发现。糖被层能形成荚膜,从而可以防止细菌的化学伤害,并能让细菌与惰性表面相连接。糖被层的消失减少了细菌营养的供给,细菌对环境的适应性也就相应的减弱了。2 HOU-Cn对枯草杆菌细胞膜渗透性、电导率和膜蛋白的影响在HOU-C_n的作用下,枯草杆菌细胞膜的电导率和渗透性随着HOU-C_n碳链的延长而逐渐增加,荧光分析实验表明,HOU-C_n与枯草杆菌膜蛋白通过疏水作用结合而使膜蛋白构象发生改变,荧光偏振值P减小,从而使使细胞膜流动性变大;这表明HOU-C_n的抑菌作用可能由膜脂结构的改变引起的,随着枯草杆菌细胞膜的通透性和电导率的增加,细胞内容物质不断向胞外扩散,导致细菌死亡;3 HOU-C_n对枯草杆菌脂肪酸合成酶活性的影响枯草杆菌脂肪酸合成酶是由7种酶和一个酰基载体蛋白(ACP)组成的多酶复合体系,酶的活性是由7个酶的活性共同组成。枯草芽孢杆菌与HOU-C_n共培养后,细菌内脂肪酸合成酶的活性明显受到抑制,HOU-C_n对细菌体内脂肪酸合成酶的活性的抑制随同系物分子中烷酰基碳原子数的增加而增强。表明HOU-C_n可以使脂肪酸的合成减少,进而影响到细菌的生命活动。4 HOU-C_n对枯草杆菌脂肪酸的影响脂肪酸是细胞生物膜的重要组成成分,脂肪酸可以分为饱和脂肪酸和不饱和脂肪酸,不饱和脂肪酸能维持细胞膜的相对流动性,以保正细胞的正常生理功能。通过气相色谱法研究发现,随着HOU-C_n碳链的延长,枯草杆菌中的饱和脂肪酸棕榈酸(C16:0)、硬脂酸(C18:0)以及不饱和脂肪酸油酸(C18:1n-9)以及亚麻酸(C18:3n-3)的含量逐渐降低,但是饱和脂肪酸的相对比例却增加,不饱和脂肪酸降低,细胞膜的刚性增加、粘度降低,细胞膜变的易破裂。从以上结果可推断出HOU-C_n能破坏细菌的糖被层来减弱细菌的营养供应,并且减少细菌内脂肪酸的含量、通过增加细胞膜的流动性来增加细胞膜的通透性以及抑制脂肪酸合成酶的活性来改变细菌内饱和以及不饱和脂肪酸的含量。随着HOU-C_n浓度的增加,细菌破裂死亡,进而发挥抑菌作用。
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