【摘 要】
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Anti-Angiogenic Agent(简称3A),是首次从组织型纤溶酶激活剂中发现的抗血管内皮细胞生长抑制素,分子量为10KD左右,具抑制肿瘤生长功能.该蛋白在基因重组的大肠杆菌培养中以
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Anti-Angiogenic Agent(简称3A),是首次从组织型纤溶酶激活剂中发现的抗血管内皮细胞生长抑制素,分子量为10KD左右,具抑制肿瘤生长功能.该蛋白在基因重组的大肠杆菌培养中以包涵体的形式表达.该课题对基因工程3A包涵体的溶解和蛋白复性条件进行研究和采用凝胶过滤层析对3A蛋白进行分离研究.包涵体溶解充分后,离心所得的上清液中总蛋白的浓度可达26.2mg/ml,其中3A蛋白的浓度为9.99mg/ml.通过Sephadex G75对3A变性蛋白进行分离,该步收率可达85.83%,SDS-PAGE电泳扫描纯度可达100%.采用分步稀释法对3A变性蛋白进行复性,在3A蛋白复性浓度为0.1mg/ml时,加入L-精氨酸的浓度高于0.6M,GSH/GSSG介于2:1~3:1之间,并添加浓度为10<-6>M的Zn<2+>作辅助剂,pH为8.1~8.2,所得到的3A复性蛋白的活性最高.采用Sephadex G100对3A复性蛋白进行纯化,该步3A蛋白的收率为53.62%,SDS-PAGE电泳扫描纯度可达100%,经HPLC检测后纯度为71.84%,活性蛋白以人脐静脉内皮细胞为受检细胞,进行定性和定量的MTT法的活性检测,结果表明:3A蛋白的IC<,50>为1.995μ g/ml.
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