布鲁菌内蒙古分离株部分外膜蛋白基因的克隆与序列分析

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:king5440
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本研究根据GenBank中已发表的布鲁菌株基因序列设计特异性引物。应用聚合酶链式反应(PCR)技术,扩增出6个内蒙古分离株(NH-B1、NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2、NH-R3)的OMP19、OMP28、OMP25、OMP31基因,将纯化的目的DNA与PMD19-T载体连接,转化DH5α感受态细胞,提取质粒,用PCR法鉴定,将鉴定为含有阳性质粒的菌液测定基因序列。测序结果表明:测定的OMP19基因节段长618bp,均包含完整的开放性阅读框(Open Reading Frame,ORF),位于43~576bp;OMP28基因节段长953 bp,包含完整的开放性阅读框(ORF),位于151~903 bp;测定的OMP25基因节段长865bp,均包含完整的开放性阅读框( ORF),位于166~808 bp;OMP31基因节段长1167bp,包含完整的开放性阅读框(ORF),位于137~859bp。应用DNAstar软件将测定序列与参考序列的核苷酸的同源性进行比较分析,6个分离株的OMP19基因核苷酸序列之间同源性很高,在99.8%~100%之间;与参考菌株的同源性也很高在99.4%~100%之间。6个分离株的OMP28基因核苷酸序列之间具有很高的同源性在99.9%~100%之间,其中,NH-B2、NH-B3、NH-R1和NH-R2同源性为100%,NH-B1和NH-R3的同源性也是100%,NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2和NH-B1、NH-R3之间同源性为99.9%;与参考菌株的同源性在99.6%~100%之间。6个分离株的OMP25基因核苷酸序列相互之间同源性很高在99.5%~100%之间;与参考菌株的同源性在99.1%~100%之间;其中,NH-B2、NH-B3、NH-R1、NH-R2与Brucella abortus S19的同源性为100%,NH-B1与Brucella suis 1330的同源性也为100%。NH-B1、NH-B2和NH-R3分离株的OMP31基因核苷酸序列相互之间同源性为100%;与参考菌株的同源性在99.6%~100%之间。6个分离株同一组之间,其同源性均大于99%,与参考菌株相比,其各自的同源性亦保持在98%以上,显示布鲁菌OMP19、OMP25、OMP28以及OMP31基因种间的高度保守性,这与参考文献结果相一致。
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