骨髓基质细胞生物学特性及眼内移植实验研究

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目的:视网膜是视神经系统中的一个重要组成部分。视网膜病变在临床上很常见,也是致盲的重要原因,例如青光眼、遗传性视网膜色素变性、视神经挫伤及老年性黄斑变性等。但目前对这些视网膜损伤的治疗并不满意,尤其是对重度和晚期病变更是如此。获得大量具有视网膜神经特性的细胞才能真正达到治疗这些疾病的目的。近年来干细胞研究的不断深入使得细胞替代疗法成为可能。我们选取兔骨髓基质细胞进行体外培养和扩增后移植入自体玻璃体内,观察骨髓基质细胞的存活及分化,为视网膜疾病的治疗摸索可靠的移植方式和可行的细胞来源。 方法:抽取兔胫骨上端全骨髓进行体外培养,利用骨髓基质细胞的塑料贴附性,通过换液自然筛选法去除造血细胞获得纯化的骨髓基质细胞。原代细胞培养后按1:2传代。将第三代传代细胞进行DAPI标记,消化离心后用无血清的DMEM培养基制成5×10~6个/ml密度的悬液备用。骨髓基质细胞来源兔点用表麻剂,注射器抽0.1ml植入玻璃体内。术后正常饲养,动态观察眼底。4周后处死动物,取眼球做连续冰冻切片。冰冻切片在丙酮中固定5分钟进行快速HE染色,相应切片直接在免疫荧光显微镜下观察,照相。 结果:骨髓基质细胞在塑料培养皿中贴壁生长,3天后增殖迅速,7-10天大部分融合,排列呈成纤维样细胞。传代细胞3-4天可铺满皿底,细胞旋涡样排列,形态与原代细胞保持一致。移植后动物冰冻切片可见DAPI阳性细胞,玻璃体内细胞聚集成团,细胞形态不规则,伸出突起胞核大而圆,类似视网膜样细胞。 结论:骨髓基质细胞易于培养扩增速度快,可以通过贴壁的特性加以分离。骨髓基质细胞能较长时间传代培养且细胞形态不发生明显改变。骨髓基质细胞在玻璃体内移植至少能存活4周,在眼内微环境中有向视网膜细胞分化的趋势。玻璃体内移植是一种简便可行的移植方式。
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