论文部分内容阅读
乳腺癌耐药蛋白(BreastCancerResistanceProtein,BCRP)在人体正常组织和多种肿瘤细胞内均有表达,对药物的体内行为产生重要影响,引发肿瘤细胞对药物产生耐药性,药物临床疗效差等问题。本文针对肝部转运蛋白BCRP,设计了两种纳米载体,以期通过抑制肝部BCRP对药物的外排作用,改变药物的体内过程,降低药物毒副作用,逆转肿瘤细胞的多药耐药(MultidrugResistance,MDR),提高抗肿瘤药物的疗效。本课题主要在以下几个方面进行了系统的研究,并且取得了进展。
1、以高表达BCRP的MDCKⅡ/BCRP及野生型MDCKⅡ/wt为细胞模型,考察辅料对BCRP的调节作用。结果表明,PEO20-PPO70-PEO20对BCRP具有良好的调节作用,且在浓度为5～30μM范围内对BCRP均有抑制作用,这为纳米载体的处方设计提供了理论依据。
2、以PEO20-PPO70-PEO20为功能性辅料,制备了包载伊立替康(CPT-11)的PEO-PPO-PEO胶束。该胶束粒径为22.46±3.41nm,粒度分布窄,形状呈球形,包封率为72.3±0.6％。
3、PEO-PPO-PEO胶束与MDCKⅡ/BCRP细胞共孵育结果表明,胶束制剂组CPT-11在耐药细胞内的摄取量是注射液组的2.78±0.15倍,对BCRP具有良好的调节作用。对PEO-PPO-PEO胶束进行消化道毒性考察,结果表明,PEO-PPO-PEO胶束可通过作用于肝胆管处的BCRP,降低药物的胆汁排泄量,改善CPT-11引发的迟发型腹泻,减少药物对消化道粘膜的损伤。
4、合成了功能性辅料Gal-PEO-PPO-PEO,利用该辅料制备了包载米托蒽醌(MX)的双功能脂质体(LPG),并对其进行了体外评价。结果表明,LPG粒径为100.57±0.75nm,粒度分布窄,Zeta电位为-59.28±1.73mV,形状呈球形,包封率为97.33±0.30％。LPG的体外释放度研究显示LPG可延缓药物的释放。
5、考察LPG与MDCKⅡ/BCRP及MDCKⅡ/wt细胞共孵育后药物被细胞摄取情况,LPG组细胞对MX的摄取量较注射液组及联合用药组显著提高,MDCKⅡ/BCRP中LPG组摄取量是注射液组的14.9±0.3倍,表明LPG对BCRP具有良好的调节作用。
6、进行药动学考察,结果表明,LPG可延长药物在体内的循环时间,降低药物的清除率,增加药物的生物利用度。用活体成像考察载体体内分布,结果表明,LPG显著改变了药物的体内分布,其在肝的蓄积量是普通脂质体的2.1倍,PEO-PPO-PEO单独修饰的脂质体(LP)的1.5倍,对肝具有良好的靶向作用,这为双功能脂质体作为肝癌治疗的纳米载体提供了理论依据。
7、肝癌细胞HepG2药效学实验结果表明,LPG可显著降低MX注射液的IC50值,效果较简单脂质体及LP显著,LPG可显著增强药物对肿瘤细胞的杀伤能力,提高药物的抗肿瘤活性。
8、对基于转运蛋白的纳米载体进行探讨,结果表明,利用具有转运蛋白抑制作用的功能性辅料设计的纳米载体尤其是根据药物和疾病特点个性化设计的纳米载体,可提高药物的生物利用度,有效逆转MDR,降低药物的毒副作用,在肿瘤治疗中具有广泛的应用前景。