重复序列类人胶原蛋白表达载体的构建及在毕赤酵母中的分泌表达

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胶原蛋白约占脊椎动物总蛋白的30%,对维护细胞、组织、器官的正常生理功能和损伤修复有重要作用。基于人Ⅲ型胶原蛋白α1链胶原域Gly-X-Y(甘氨酸-X-Y)的三肽重复序列特征,设计并人工合成了一段类人胶原蛋白基因单体gel。通过一系列体外酶切连接,利用大肠杆菌作为克隆宿主,最终构建了含有同向六串联类人胶原蛋白基因单体的类人胶原蛋白表达载体pPIC9KG6,通过酶切和DNA测序鉴定构建成功。将pPIC9KG6电转化毕赤酵母GS115,经G418筛选得到高拷贝重组酵母,选取高表达菌株进行甲醇诱导表达类人
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