牙鲆弹状病毒(Hirame rhabdovirus,HRV)是弹状病毒科粒外弹状病毒属新成员,具有强烈的致病性,给全球海水养殖业造成了严重的经济损失。病毒在入侵宿主细胞的过程中,宿主细胞通过模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)监测病原相关分子模式(pathogen associated molecular patterns,PAMPs)而感知病毒的入侵,并通过信号通路的级联传递,协调病毒感染早期宿主反应,并随即激活宿主获得性免疫反应。然而,通过和宿主的相互作用,RNA病毒进化出逃逸宿主RLRs免疫监视的不同策略来干扰宿主RLRs抗病毒信号,阻断RLRs信号的传导,从而导致宿主发病。多数情况下,病毒倾向于利用非结构蛋白进行此功能。而HRV致病机制及逃逸宿主免疫监视的分子机制还没有得到明确的阐述。本研究根据Gen Bank中HRV中国株全长基因序列设计特异性引物,用RT-PCR方法从病毒悬液中分段扩增HRV全长基因组序列,得到的基因序列拼接后,经BLAST比对发现与中国株的同源性达到99.77%,为后续获得感染性克隆奠定基础。根据Gen Bank中HRV中国株非结构蛋白(Non-virion perotein,NV)基因序列设计特异性引物,用RT-PCR方法扩增NV基因,鉴定无误后连接到大肠杆菌p ColdⅠ载体中,构建的重组表达质粒p ColdⅠ-NV在大肠杆菌BL21(T1®)宿主菌中获得高效表达,表达产物以可溶性蛋白存在。经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得有活性的NV蛋白。以浓缩纯化的HRV作为抗原免疫Balb/c小鼠,得到效价为1:51200的抗HRV多克隆抗体。Western-blot和ELISA试验结果表明,抗HRV多克隆抗体能特异性识别表达获得的HRV NV重组蛋白,证明NV重组蛋白抗原性良好。本实验成功获得有活性的NV蛋白,为研究牙鲆弹状病毒逃逸宿主免疫监视的机制奠定了实验基础。