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人B淋巴细胞刺激因子（hBAFF）是一种B淋巴细胞的共刺激因子，属TNF超家族成员。本文一方面利用巴斯德毕赤酵母（pichia pastoris）这一真核表达系统成功构建、表达了hBAFF蛋白；同时对毕赤酵母分泌表达得到的hBAFF进行SDS-PAGE、Western blotting、ELISA等方面的检测。另一方面将hBAFF基因通过柔性臂（Gly4Ser）2与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）相连，通过大肠杆菌（E．coli）表达系统进行融合蛋白的表达；并对表达蛋白做Western blotting、荧光及B淋巴细胞增殖的活性测定。实验设计及结果如下： 1 EGFP-hBAFF融合蛋白的表达纯化及活性测定 将人B淋巴细胞刺激因子和增强型绿色荧光蛋白通过（Gly4Ser）2linker相连接，在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达融合蛋白EGFP-hBAFF；并对该蛋白进行Ni2+-IDA亲和层析柱纯化，纯化的蛋白经检测具有EGFP的荧光活性和hBAFF的B淋巴细胞增殖活性。 2 hBAFF在毕赤酵母中的表达及产物鉴定 克隆得到hBAFF基因与穿梭载体pPIC9连接得到pPIC9-hBAFF重组质粒，线性化后电转酵母菌GS115中，挑选出阳性重组子进行诱导表达；并对表达条件优化，表达产物进行Western blotting、ELISA方面的检测。结果表明，当甲醇浓度为1％、诱导时间为72h、温度为20℃时hBAFF蛋白表达量最高。