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口蹄疫( Foot-and-mouth disease, FMD )是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus, FMDV)引起的偶蹄动物共患的、接触性传染病。FMDV有七种血清型、七十多种亚型,变异性强,给病毒的防治造成很大困难。它可导致国家的畜产品进出口贸易受限,造成巨大的经济损失和政治影响。因此,建立准确、快捷的区分感染活病毒(发病或注射弱毒疫苗)和注射灭活疫苗动物的诊断方法,在检测和防止FMD的发生、活畜检疫等方面都是十分迫切需要的。以口蹄疫非结构蛋白3AB作为抗原的ELISA,适用于鉴别诊断感染和注苗动物。以3ABC基因片断为模板,经PCR扩增得到了684bp的3AB基因片断,与pET32а(+)连接后,转化宿主菌BL21(DE3) plysS,待菌体浓度为0.8OD550时,IPTG诱导表达目的蛋白。SDS-PAGE和Western Blot结果表明,3AB基因得到了正确表达,表达的重组3AB蛋白为非溶性融合蛋白,分子量约为50Kda。ELISA结果显示,重组3AB蛋白可用于猪、牛口蹄疫病毒感染与疫苗免疫抗体的鉴别诊断。重组口蹄疫病毒非结构蛋白3AB作为检测抗原包被酶标板反应孔,以辣根过氧化物酶标记的重组蛋白A/G作为第二抗体,建立了抗非结构蛋白抗体检测的方法。结果表明,在1746份免疫猪血清中,3AB-ELISA对免疫猪血清的特异性为98.68%;在1077份健康非免疫猪血清中,3AB-ELISA对健康非免疫猪血清的特异性为97.96%;在36份人工感染猪血清中,3AB-ELISA对阳性检出率为100%。而牛特异性的各项指标分别为94.04%,97.96%和阳性检出率为100%。进一步改进了3AB-ELISA检测方法,使用了脱脂奶粉和大肠杆菌裂解液做为该方法的阻断剂,有效降低了背景值,消除了非特异性反应。采用TMB作显色剂,对检测环境的要求比OPD的更宽,使该检测方法的实用性更好。同时,3AB-ELISA与国外同类试剂盒比较,对阳性牛血清检出率,3AB-ELISA的阳性率为91.7%,UBI试剂盒为79.2%,高出UBI试剂盒12.5个百分点。对阴性牛血清检测率,两种试剂盒几乎一致。