匍匐翦股颖组培再生体系的建立及遗传转化的初步研究

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匍匐翦股颖(AgrostisstoloniferaL.)是一种多年生冷季型草坪草,具有耐修剪、观赏性高等优点,在世界各国广泛应用,是我国北方地区建植高档草坪的重要草种。 本试验以匍匐翦股颖的成熟种子为外植体,研究了不同匍匐翦股颖种子在愈伤组织诱导、芽的分化以及根的诱导等过程中,不同基本培养基、不同激素浓度及配比等条件下对其再生体系建立的影响,并找出了适宜匍匐翦股颖再生体系建立的最佳条件,得到一套完整的组培再生体系,并对其遗传转化进行了初步研究,为匍匐翦股颖目的基因的导入打下了基础。主要研究结果如下: 1.外植体消毒:匍匐翦股颖的种子在流水中冲洗30min,70﹪的酒精消毒30s,0.1﹪升汞消毒12~15min,此种消毒处理效果良好。 2.愈伤组织的诱导:在MS+2,4-D2mg/L+6-BA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L培养基上,暗培养2周,三个品种愈伤组织的诱导率达到最大值,L-93为78.7﹪,pennA-160.8﹪,pennA-459.8﹪。 3.愈伤组织的继代:在MS+2,4-D2mg/L+6-BA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L愈伤组织继代培养基上,愈伤组织生长快,结构紧实,容易分化,不出现纤毛结构。 4.芽的诱导:诱导匍匐翦股颖愈伤组织芽的分化时,采用MSO+蔗糖15g/L+琼脂7g/L培养基,不添加任何激素,愈伤组织芽的分化率达到85﹪以上。 5.根的诱导:诱导生根在MSO+IBA0.2mg/L+蔗糖15g/L+琼脂7g/L培养基上进行时,生根率达70﹪以上。其中L-93可达到88.8﹪。 6.组培苗的移栽:选取健壮幼苗移栽,并经驯化炼苗15-20天后,大田成活率可达90﹪以上。 7.确定了对农杆菌LBA4404有明显抑制作用效果的抗生素类型和适宜的浓度:抗菌素采用头孢霉素,最佳抑菌浓度为300mg/L。 8.确定潮霉素抑制植物细胞生长、分化的临界浓度为50mg/L。
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