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[目的]随着碳青霉烯类抗生素的广泛使用,耐碳青霉烯类肺炎克雷伯临床菌株逐年增多对临床抗感染治疗构成了严重的威胁。通过分析菌株耐药表型,指导临床合理选用抗菌药物;通过开展分子流行病学研究,确定耐药菌株的优势ST型;建立主要耐药基因检测方法,对流行菌株携带的碳青霉烯类耐药基因进行鉴定,探究耐药菌株的耐药分子机制,为耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的防控策略提供可靠数据和理论依据。[方法]收集昆明医科大学第二附属医院2015年1月~2017年12月临床分离出的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌株147株,采用VITEK-2 Compact全自动细菌鉴定系统进行菌种生化表型和药敏鉴定,同时测定16SrRNA基因从分子水平进行菌种鉴定;选择多位点序列分型(MLST)对耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行分型;采用PCR法对碳青霉烯酶耐药基因blaIMP、blaVIM、blaSPM、blaNDM、blaKPC、blaBIC、blaAIM、blaGIM、blaSIM和blaDIM进行检测,并测序验证。[结果](1)147株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)分离自痰液58.50%、尿液15.65%、分泌物10.20%、其他7.48%、血液6.80%。147株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌最多来源于ICU科,占29.25%,其次分别为神经外科27.21%、泌尿外科10.88、烧伤科8.84%、肝胆胰外科8.84%、其他科室14.97%。(2)耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类药物美洛培南、亚胺培南、厄他培南中的1种及以上耐药率达100%,对3种药物同时耐药的耐药率为89.80%;2015年CRKP对头孢他定、阿米卡星、氨曲南、他唑巴坦、左氧氟沙星耐药率为92.31%、89.74%、100%、100%、97.44;2016年CRKP对头孢他定、阿米卡星、氨曲南、他唑巴坦、左氧氟沙星耐药率为 100%、88.89%、95.56%、97.78%、95.56;2017 年 CRKP对头孢他定、阿米卡星、氨曲南、他唑巴坦、左氧氟沙星耐药率为96.83%、85.71%、96.83%、96.83%、98.41。(3)MLST分型结果显示,147株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌共分为13个ST型,ST11型是本研究的主要优势ST型。其中2015年共8 个 ST 型,为 ST11(29 株)、ST23(2 株)、ST37(2 株)、ST375(2 株)、ST65(1 株)、ST731(1 株)、ST2193(1 株)、ST2260(1 株);2016 年共 5 个 ST型,为 ST11(39 株)、ST37(2 株)、ST231(2 株)、ST86(1 株)、ST420(1株);2017 年共 6 个 ST 型,为 ST11(58 株)、ST23(1 株)、ST25(1 株)、ST37(1株)、ST86(1株)、ST792(1株),耐药菌株表现出克隆多样性特点。(4)耐药基因检测结果显示,2015~2017年均检出KPC、NDM,而BIC、VIM、SIM、IMP、SPM、AIM、GIM和DIM基因均未检出。其中2015年KPC阳性检出率为100%,其次为NDM2.56%;2016年KPC阳性检出率为95.56%,其次为NDM 4.44%;2017年KPC阳性检出率为100%,其次为NDM6.35%。[结论](1)147株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌最多分离自痰液,占58.50%;其次为尿液,占15.65%。147株CRKP分离最多的科室为ICU,占29.25%,其次为神经外科,占27.21。耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对临床常用的多种抗菌药β-内酰胺酶抑制剂、喹诺酮类、头孢菌素类和氨基糖苷类高度耐药,呈现出多重耐药甚至泛耐药现象。从三年的耐药情况来看,菌株对阿米卡星和他唑巴坦有小幅降低的趋势,而对左氧氟沙星有小幅升高的趋势,这一趋势有待进一步观察。(2)147株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌菌株共分为13个ST型,2015年8个ST型,2016 年 5 个 ST 型,2017 年 6 个 ST 型。2015 年 ST11 占 74.36%,2016 年ST11占86.67%,2017年ST11占92.06%,三年均以ST11型流行为主,且ST11型菌所占比率呈逐年升高的趋势。2016年跟2015年相比,未发现ST23、ST65、ST375、ST731、ST2193、ST2260,但新出现了 ST86、ST231、ST420;2017年跟2016年相比,未发现ST231、ST420,但新出现了 ST23、ST25、ST792,耐药菌株表现为克隆多样性的特点,需警惕ST11型以外其他克隆菌株的流行。(3)碳青霉烯酶基因检测结果显示,三年均检出KPC、NDM,而BIC、SIM、VIM、IMP、SPM、AIM、GIM、和DIM均未检出。2015~2017年KPC阳性检出率分别为100%、95.56%、100%,KPC检出率无下降趋势,而NDM检出率呈现小幅上升趋势。携带碳青霉烯酶KPC基因是耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。多重或广泛耐药现象给临床治疗带来了严峻的挑战,必须加强对该类临床细菌的监测和流行病学的进一步研究,探讨有协同作用的新联合用药方案来提高抗感染成功率,合理指导临床治疗,及时采取有效措施预防耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌所导致的医院感染流行。