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目的:观察改良内皮抑素(RGD序列修饰)以pCI质粒为载体基因转移抑制碱烧伤诱导的兔角膜新生血管(CNV)的效果,探讨其作用机制。
方法:1、配制转染液:于注射前分别配制50μg·μL-1pCI-ES,50μg·μL-1pCI-polyRGD-ES质粒与脂质体转染液,比例为1:1(1μg质粒与1μL脂质体混合),室温下摇匀,试验组兔的注射剂量为含50μg质粒的转染液。2、动物实验:将浸有1mol·L-1NaOH的滤纸置于角膜中央,建立角膜碱烧伤模型,共27只兔子54只眼,随机分为三组,每组9只。在碱烧伤后立即分别在球结膜下注射50μg·μL-1pCI-poly RGD-ES转染液、50μg·μL-1pCI-ES转染液和PBS缓冲液各0.2mL。每周二次,共4次。动态观察CNV的生长状况,并照相记录,计算新生血管面积。每组分别在碱烧伤后3、7、14d空气栓塞处死3只兔,取角膜(包括2唧宽角巩膜缘)组织。利用免疫组化方法检测角膜血管内皮生长因子(VEGF)的表达。于碱烧伤后3d、7d和14d抽取房水0.1ml,-80℃冻存,ELISA方法检测房水中VEGF的表达。
结果:pCI-poly RGD-ES、pCI-ES治疗组CNV的面积、角膜及房水中VEGF的表达均明显少于PBS缓冲液对照组(P<0.05);而pCI-poly RGD-ES治疗组的CNV的长度和面积、角膜及房水中VEGF的表达均明显少于pCI-ES治疗组(P<0.05)。
结论:改良poly RGD序列内皮抑素在治疗碱烧伤诱导的角膜新生血管方面明显优于内皮抑素。脂质体介导得以pCI质粒为载体基因转移效果显著。