【摘 要】
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目的检测骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化水平,观察去甲基化对人骨肉瘤细胞增殖及其miRNA-34a表达的影响,探讨骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化的调控作用。方法运用实时定量PCR(rea
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目的检测骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化水平,观察去甲基化对人骨肉瘤细胞增殖及其miRNA-34a表达的影响,探讨骨肉瘤miRNA-34a启动子甲基化的调控作用。方法运用实时定量PCR(real-time PCR)检测对比人骨肉瘤细胞株(MG-63、SAOS-2)及成骨细胞株(hFOB1.19)中miRNA-34a的表达差异;采用基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析质谱技术(MALDI-TOF)检测对比人骨肉瘤细胞与成骨细胞、骨肉瘤蜡块组织与正常骨组织中mi RNA-34a启动子CpG岛甲基化水平的差异;用1%5-氮杂-胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,Aza)对人骨肉瘤细胞进行去甲基化处理,观察去甲基化处理后人骨肉瘤细胞生长状态,并检测分析去甲基化处理前后人骨肉瘤细胞中mi RNA-34a表达量及其启动子甲基化水平的变化。结果miRNA-34a在MG-63、SAOS-2细胞中的表达量明显低于hFOB1.19细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。MG-63、SAOS-2细胞中miRNA-34a基因启动子CpG岛甲基化水平高于hFOB1.19细胞,差异具有统计学意义(P<0.05)。骨肉瘤组织中mi RNA-34a基因启动子CpG岛甲基化水平高于正常骨组织对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);MG-63、SAOS-2细胞经去甲基化处理后生长增殖受限,检测miRNA-34a均表达上调(P<0.05),且miRNA-34a启动子CpG岛甲基化水平均降低(P<0.05)。结论骨肉瘤miRNA-34a基因启动子为高甲基化水平,miRNA-34a基因表达下调与其启动子高甲基化修饰有关,进而影响了其抑制骨肉瘤的生物学作用;提示miRNA-34a基因与DNA甲基化的调控修饰可能参与了骨肉瘤的增殖发展过程。
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